某些細菌在其發育的一定階段可以形成一個內生孢子，即為芽孢。芽孢形成後並不脫離原細菌菌體，它的形狀、大小和在菌體的位置都是一定的。老熟的芽孢可自菌體中脫落出來。芽孢結構上的特點是壁厚和細胞質濃厚，所以不易著色，通常多采用著色力強的染色劑和用加熱等手段促使芽孢著色，並利用複染的方法對比原細菌菌體和芽孢，才易於在顯微鏡下看到它們。但是，若用簡單染色法使菌體著色而芽孢無色也可以襯托出芽孢的形狀、大小和位置。
【實驗目的】
掌握細菌芽孢染色的方法。
【實驗原理】
細菌的芽孢含水量少，脂肪含量高，芽孢壁較厚，對染料的透性差，不易著色，但是一旦著色又難以脫色。
通常，芽孢染色采用弱堿性染料孔雀綠在加熱的條件下進行。染色完畢，用蒸餾水衝洗。因孔雀綠是弱堿性染料，與菌體結合力較差，因此易被水衝洗掉，而進入芽孢的孔雀綠卻難於溶出。水洗後，再用一種呈紅色的堿性染料複染，使菌體和芽孢呈現不同顏色。
【實驗材料、藥品及器具】
1、菌種 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）
2、染液 孔雀綠染液
藏花紅染液
3、器皿 顯微鏡、酒精燈、鑷子、洗淨的載玻片4 片、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、玻璃紅、洗瓶裝蒸餾水、接種環。
【實驗步驟】
1、取培養24h左右的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌分別塗片、幹燥、固定。
2、在塗片部分用吸水紙條蓋住，然後向紙條滴加孔雀綠液至飽和。
3、將塗片逐漸加熱至微冒蒸汽並不時添加染液以防止吸水紙條幹燥。染色
2-8 分鍾。
4、除去吸水紙條，用蒸餾水輕輕衝洗掉多餘染液。
5、用藏花紅染液複染30~60S。
6、水洗，風幹或烘幹後鏡檢。
【實驗結果】
1、首先用低倍鏡，再用油浸鏡檢查製片，注意芽孢的顏色和菌體的顏色。
2、繪製芽孢圖。注意芽孢在菌體內的位置、大小和形狀並繪製遊離芽孢形態圖。
【思考題】
1、為什麽經孔雀綠染色後，水洗再複染紅色染液隻能染上菌體？
2、用革蘭氏染色能否看到芽孢，為什麽？
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