一、實驗目的
通過對澱粉酶和過氧化氫酶的定性測定，加深對酶和酶促反應的感性認識
二、實驗原理
酶是微生物機體內生物合成的一種生物催化劑，它是高分子蛋白質，具有催化生物化學反應加速進行，並具有傳遞電子、原子和化學基團的作用。微生物的酶按它所在細胞的部位分為胞外酶、胞內酶及表麵酶。本實驗對胞外酶中的兩種即澱粉酶和過氧化氫酶(亦叫接觸酶)進行定性測定。
細菌澱粉酶能將遇碘呈藍色的澱粉水解為遇碘不顯色的糊精，並進一步轉化為糖，澱粉被酶催化分解後用碘檢測不到其變色現象；過氧化氫酶能將過氧化氫快速分解為水和氧氣，能用肉眼很容易的觀測到產生的氣泡。
三、儀器和材料
1、試管(15 mm-150 mm)4支、試管架1個、培養皿(90mm)3套、接種環。
2、肉膏腖、澱粉瓊脂培養基1瓶(約50 ml)
3、0.2％澱粉溶液1滴瓶、革氏碘液1滴瓶、10％--3％過氧化氫1滴瓶。
4、生活汙水活性汙泥混合液或枯草杆菌培養液一瓶。枯草杆菌和大腸杆菌斜麵各一支。
四、實驗內容和操作方法
(一)生活汙水活性汙泥混合液中澱粉酶的測定
1．取4支幹淨的試管，按1、2、3對照編號。放在試管架上備用。
2．在1號、2號、3號試管內分別加入 5ml、10ml、15ml的活性汙泥混合液，再在1號和2號試管中分別加10 ml和5 ml蒸餾水。在對照管內加15 ml蒸餾水。
3．在1號、2號、3號及對照管中分別加入O．2％的澱粉液若幹滴(澱粉液的用量，在做預備實驗時根據樣品中澱粉酶含量多少而定)，迅速搖勻並記下反應的初始時間。
4．在上述4個管內分別加若幹滴碘液(碘液用量在預備實驗時酌定)，迅速搖勻，這時各管均呈藍色。
5．觀察結果。注意各管的變化，記下各管藍色完全消失時的時間(即澱粉酶和澱粉反應完全的時間)，並對結果進行分析。
(二)細菌澱粉酶在固體培養基中的擴散實驗
1．將肉膏腖澱粉瓊脂培養基加熱融化，待冷至45℃左右倒人無菌培養皿內(每皿約10 ml)，共倒3個，靜置待冷凝即成平板。
2．在無菌操作條件下，用接種環分別挑取枯草杆菌、大腸杆菌和活性汙泥各一環分別在3個平板上點種5個點。倒置於37℃恒溫箱內培養24～48 h。
3．觀察結果，取出平板，分別在3個平板內菌落周圍滴加碘液，觀察菌落周圍顏色的變化。若在菌落周圍有一個無色的透明圈，說明該細菌產生澱粉酶並擴散到基質中去。若菌落周圍仍為藍色，說明該細菌不產生澱粉酶。
(三)過氧化氫酶的定性測定
1．將配備的枯草杆菌和大腸杆菌斜麵各1支放在試管架上。
2．用滴管吸取過氧化氫滴加入兩管菌種斜麵上，有氣泡產生的為接觸酶陽性(有過氧化氫酶)；無氣泡產生的為接觸酶陰性(無過氧化氫酶)。
五、實驗結果
把所觀察到的現象記錄下來，進行分析。
六、思考題
1．澱粉酶定性測定中對照應呈什麽顏色?為什麽?各菌落呈什麽顏色?為什麽?
2．各菌落滴加過氧化氫後呈什麽現象?說明什麽問題?
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