各菌種保存方法的優缺點
1．斜麵低溫保藏法
將菌種接種在適宜的固體斜麵培養基上，待菌充分生長後，棉塞部分用油紙包紮好，移至2—8℃的冰箱中保藏。
保藏時間依微生物的種類而有不同，黴菌、放線菌及有芽孢的細菌保存2—4個月，移種一次。酵母菌兩個月，細菌最好每月移種一次。
此法為實驗室和工廠菌種室常用的保藏法，優點是操作簡單，使用方便，不需特殊設備，能隨時檢查所保藏的菌株是否死亡、變異與汙染雜菌等。缺點是容易變異，因為培養基的物理、化學特性不是嚴格恒定的，屢次傳代會使微生物的代謝改變，而影響微生物的性狀；汙染雜菌的機會亦較多。
2．液體石蠟保藏法
（1）將液體石蠟分裝於三角燒瓶內，塞上棉塞，並用牛皮紙包紮，1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌30分鍾，然後放在40℃溫箱中，使水汽蒸發掉，備用。
（2）將需要保藏的菌種，在最適宜的斜麵培養基中培養，使得到健壯的菌體或孢子。
（3）用滅菌吸管吸取滅菌的液體石蠟，注入已長好菌的斜麵上，其用量以高出斜麵頂端1cm為準，使菌種與空氣隔絕。
（4）將試管直立，置低溫或室溫下保存（有的微生物在室溫下比冰箱中保存的時間還要長）。
此法實用而效果好。黴菌、放線菌、芽孢細菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1—2年，一般無芽孢細菌也可保藏1年左右，甚至用一般方法很難保藏的腦膜炎球菌，在37℃溫箱內，亦可保藏3個月之久。此法的優點是製作簡單，不需特殊設備，且不需經常移種。缺點是保存時必須直立放置，所占位置較大，同時也不便攜帶。從液體石蠟下麵取培養物移種後，接種環在火焰上燒灼時，培養物容易與殘留的液體石蠟一起飛濺，應特別注意。
3．濾紙保藏法
（1）將濾紙剪成0．5×1．2cm的小條，裝入0．6×8cm的安瓿管中，每管1—2張，塞以棉塞，1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌30分鍾。
（2）將需要保存的菌種，在適宜的斜麵培養基上培養，使充分生長。
（3）取滅菌脫脂牛乳1—2ml滴加在滅菌培養皿或試管內，取數環菌苔在牛乳內混勻，製成濃懸液。
（4）用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。
（5）將安瓿管放入內有五氧化二磷作吸水劑的幹燥器中，用真空泵抽氣至幹。
（6）將棉花塞入管內，用火焰按圖Ⅶ-13熔封，保存於低溫下。
（7）需要使用菌種，複活培養時，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃破裂，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管開啟後，取出濾紙，放入液體培養基內，置溫箱中培養。
細菌、酵母菌、絲狀真菌均可用此法保藏，前兩者可保藏2年左右，有些絲狀真菌甚至可保藏14—17年之久。此法較液氮、冷凍幹燥法簡便，不需要特殊設備。
4．沙土保藏法
（1）取河沙加入10％稀鹽酸，加熱煮沸30分鍾，以去除其中的有機質。
（2）倒去酸水，用自來水衝洗至中性。
（3）烘幹，用40目篩子過篩，以去掉粗顆粒，備用。
（4）另取非耕作層的不含腐植質的瘦黃土或紅土，加自來水浸泡洗滌數次，直至中性。
（5）烘幹，碾碎，通過100目篩子過篩，以去除粗顆粒。
（6）按一份黃土、三份沙的比例（或根據需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）摻合均勻，裝入10×100mm的小試管或安瓿管中，每管裝1g左右，塞上棉塞，進行滅菌，烘幹。
（7）抽樣進行無菌檢查，每10支沙土管抽一支，將沙土倒入肉湯培養基中，37℃培養48小時，若仍有雜菌，則需全部重新滅菌，再作無菌試驗，直至證明無菌，方可備用。
（8）選擇培養成熟的（一般指孢子層生長豐滿的，營養細胞用此法效果不好）優良菌種，以無菌水洗下，製成孢子懸液。
（9）於每支沙土管中加入約0．5ml（一般以剛剛使沙土潤濕為宜）孢子懸液，以接種針拌勻。
（10）放入真空幹燥器內，用真空泵抽幹水分，抽幹時間越短越好，務使在12小時內抽幹。
（11）每10支抽取一支，用接種環取出少數沙粒，接種於斜麵培養基上，進行培養，觀察生長情況和有無雜菌生長，如出現雜菌或菌落數很少或根本不長，則說明製作的沙土管有問題，尚須進一步抽樣檢查。
（12）若經檢查沒有問題，用火焰熔封管口，放冰箱或室內幹燥處保存。每半年檢查一次活力和雜菌情況。
（13）需要使用菌種，複活培養時，取沙土少許移入液體培養基內，置溫箱中培養。
此法多用於能產生孢子的微生物如黴菌、放線菌，因此在抗生素工業生產中應用最廣，效果亦好，可保存2年左右，但應用於營養細胞效果不佳。
5．液氮冷凍保藏法
（1）準備安瓿管用於液氮保藏的安瓿管，要求能耐受溫度突然變化而不致破裂，因此，需要采用硼矽酸鹽玻璃製造的安瓿管，安瓿管的大小通常使用75×10mm的，或能容1．2mm液體的。
（2）加保護劑與滅菌保存細菌、酵母菌或黴菌孢子等容易分散的細胞時，則將空安瓿管塞上棉塞，1．05kg/cm2，121．3℃滅菌15分鍾：若作保存黴菌菌絲體用則需在安瓿管內預先加入保護劑如10％的甘油蒸餾水溶液或10％二甲亞碸蒸餾水溶液，加入量以能浸沒以後加入的菌落圓塊為限，而後再用1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌15分鍾。
（3）接入菌種將菌種用10％的甘油蒸餾水溶液製成菌懸液，裝入已滅菌的安瓿管；黴菌菌絲體則可用滅菌打孔器，從平板內切取菌落圓塊，放入含有保護劑的安瓿管內，然後用火焰熔封。浸入水中檢查有無漏洞。
（4）凍結再將已封口的安瓿管以每分鍾下降1℃的慢速凍結至-30℃。若細胞急劇冷凍，則在細胞內會形成冰的結晶，因而降低存活率。
（5）保藏經凍結至-30℃的安瓿管立即放入液氮冷凍保藏器的小圓筒內，然後再將小圓筒放入液氮保藏器內。液氮保藏器內的氣相為-150℃，液態氮內為-196℃。
（6）恢複培養保藏的菌種需要用時，將安瓿管取出，立即放入38—40℃的水浴中進行急劇解凍，直到全部融化為止。再打開安瓿管，將內容物移入適宜的培養基上培養。
此法除適宜於一般微生物的保藏外，對一些用冷凍幹燥法都難以保存的微生物如支原體、衣原體、氫細菌、難以形成孢子的黴菌、噬菌體及動物細胞均可長期保藏，而且性狀不變異。缺點是需要特殊設備。
6．冷凍幹燥保藏法
（1）準備安瓿管用於冷凍幹燥菌種保藏的安瓿管宜采用中性玻璃製造，形狀可用長頸球形底的，亦稱淚滴型安瓿管，大小要求外徑6—7．5mm，長105mm，球部直徑9—11mm，壁厚0．6—1．2mm。也可用沒有球部的管狀安瓿管。塞好棉塞，1．05kg/cm2>，121．3℃滅菌30分鍾，備用。
（2）準備菌種，用冷凍幹燥法保藏的菌種，其保藏期可達數年至十數年，為了在許多年後不出差錯，故所用菌種要特別注意其純度，即不能有雜菌汙染，然後在最適培養基中用最適溫度培養，使培養出良好的培養物。細菌和酵母的菌齡要求超過對數生長期，若用對數生長期的菌種進行保藏，其存活率反而降低。一般，細菌要求24—48小時的培養物；酵母需培養3天；形成孢子的微生物則宜保存孢子；放線菌與絲狀真菌則培養7—10天。
（3）製備菌懸液與分裝以細菌斜麵為例，用脫脂牛乳2ml左右加入斜麵試管中，製成濃菌液，每支安瓿管分裝0．2ml。
（4）冷凍冷凍幹燥器有成套的裝置出售，價值昂貴，此處介紹的是簡易方法與裝置，可達到同樣的目的。
將分裝好的安瓿管放低溫冰箱中冷凍，無低溫冰箱可用冷凍劑如幹冰（固體CO2>）酒精液或幹冰丙酮液，溫度可達-70℃。將安瓿管插入冷凍劑，隻需冷凍4—5分鍾，即可使懸液結冰。
（5）真空幹燥為在真空幹燥時使樣品保持凍結狀態，需準備冷凍槽，槽內放碎冰塊與食鹽，混合均勻，可冷至-15℃。
抽氣一般若在30分鍾內能達到93．3Pa（0．7mmHg）真空度時，則幹燥物不致熔化，以後再繼續抽氣，幾小時內，肉眼可觀察到被幹燥物已趨幹燥，一般抽到真空度26．7Pa（0．2mmHg），保持壓力6—8小時即可。
（6）封口抽真空幹燥後，取出安瓿管，接在封口用的玻璃管上，可用L形五通管（圖Ⅶ-17）繼續抽氣，約10分鍾即可達到26．7Pa（0．2mmHg）。於真空狀態下，以煤氣噴燈的細火焰在安瓿管頸中央進行封口。封口以後，保存於冰箱或室溫暗處。
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