一.目的
製備植物病毒抗血清是用提純病毒作為抗原，注射兔子後刺激產生免疫反應，形成抗體的過程。分為抗原準備、免疫注射和抗血清的采集三部分。本實驗介紹常用方法，要求能基本掌握並獲得抗血清。
二.實驗材料和用具
１.提純病毒懸浮液、３公斤公兔、高壓滅菌鍋、磁力攪拌器；
２.醫用羊毛脂、石蠟油、70％乙醇、二甲苯、NaN3、凡士林。
３.用具：注射器、注射針頭、小燒杯、三角瓶、透析袋、刀片、脫脂棉、青黴素小瓶、轉子。
三.操作程序和方法
１.處理提純病毒懸浮液：如用精提純病毒，濃度為1mg/ml，如保存病毒時所用緩衝液濃度高或含有其他高滲透壓物質如尿素等，則可用pH7.2 的0.01M磷酸緩衝液透析三次（其中－次必須過夜），如病毒懸浮液中加過NaN3，則必須延長透析時間和增加次數。
２.製備Freund's不完全佐劑：在小燒杯中放入1.5g羊毛脂和8ml石蠟油，在溫水浴中化開，磁力攪拌器上混勻後經高壓滅菌後4℃下保存備用。
３.將佐劑倒入小燒杯中，在磁力攪拌下按1：1量逐滴加入病毒懸浮液，充分攪拌至乳化完全，病毒液1mg/ml含量每次用2-5mg 。(將病毒懸浮液和佐劑在小燒杯中１：１等量混合，用注射器和針頭反複推吸以使乳化完全也可)。檢測乳化程度時可滴一滴乳化液至水麵，如很快散開則乳化不完全，須繼續乳化；如能持續片刻不散開則為乳化完全。
４.兔子以個大(2-3公斤)、健康、未經免疫的白兔為好，選用公兔或未交配過的母兔均可。
５.免疫：根據不同病毒的穩定性和免疫原性，可有多種注射方法與不同間隔的方案，本實驗采用肌肉注射。
在兔子後腿外或內側肌肉上選肥厚處，剪毛後，用70 ％乙醇消毒、以9號針頭注入病毒-佐劑乳化液，進針約深2cm。注射劑量視其具體情況而定。本實驗免疫具體設計
如下：
第一周：(1).耳靜脈取血，製備少量正常血清；
(2).肌肉注射乳化病毒2/3量，皮下三點注射1/3量。
第二周：肌肉、皮下注射，用量如上。
第三周：肌肉、皮下注射，用量如上。
第六～七周：取血，測效價，效價最高時放血，製備抗血清。
６.采血：采血方法主要有靜脈采血、頸動脈采血、心髒采血等。采血所用器具要
經嚴格消毒。采血前免疫兔要給水、停食12-24小時。本實驗耳靜脈采血，步驟如下：
(1).將免疫兔裝入固定箱中，使頭和耳全部露出。人工固定亦可。
(2).耳背外緣靜脈處刮毛、用酒精將采血耳邊緣裏、外兩麵消毒。
(3).耳中部用蘸有二甲苯的脫脂棉塗擦，使耳血管充血，血流加速，其上塗一層凡士林。
(4).在耳緣已擴張血管端部，用刀片尖順血管方向縱向劃破1-2毫米的切口(此後再采血時，切口位置自端部向耳基部移動)。適度時，血液隨即流出，血液收集在滅菌小燒杯中，每次取血20-40ml。不要讓血液接觸酒精，以免發生溶血現象。
(5).切口部位用幹藥棉壓迫止血，並擦淨兔耳上殘留血跡，防止兔子抓撓造成流血或感染。
(6).可連續多次采血，每次間隔3-4天。如效價下降，可再次注射適量抗原，以維持更長采血時間，采血期間，加強動物的營養。
７.血清的析出及保存。
(1).將收集血液置室溫下凝固後，蓋好置37℃溫箱1-2小時。
(2).用解剖刀沿燒杯邊緣輕輕剝離凝血塊。
(3).蓋好置4℃冰箱過夜。
(4).吸出析出血清，在3000rpm下離心10分鍾。
(5).上清液即為無紅血球的澄清抗血清，按1/5000的量加入硫柳汞或1/1000量加入NaN3防腐。無菌分裝後密封-20℃保存。
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