一、目的
由核蛋白組成的病毒有特有的紫外吸收峰，通過紫外分光光度計使用，掌握其測定原理、操作方法及病毒純度與定量的方法。
二、主要儀器、用具及藥劑
紫外分光光度計、石英比色皿、移液管、吸管、試管、緩衝液、鏡頭紙。
三、實驗材料
TMV或CMV等病毒提純樣品懸浮液。
四、實驗步驟
１．準備好提純品及參比溶液，倒入石英比色杯。
２．打開穩壓電源及751分光光度計，將比色杯裝入樣品槽。
３．按附錄操作程序使用紫外光測量樣品在波長260nm及280nm處的光吸收值(以A或OD值表示)記錄數值。
４．每種病毒的蛋白與核酸含量有固定比例( 附表) ，用本次試驗吸收光譜比值(A260/A280)與標準比值比較。
５．用A260值計算病毒的濃度及產量。
病毒濃度(mg/ml)=A260X稀釋倍數／E0.1%1cm260nm，
E為消光係數，即在波長260nm時，濃度為0 ·1％(1mg/ml)的懸浮液，光程為1cm時的光(光密度)吸收值。對已知病毒可以從附表中查到；對未知病毒要想定量病毒，先把病毒純品幹燥稱重，配成已知濃度的病毒懸液，在260nm下測其光密度，並折算成E0.1% 1cm。
病毒產量(mg/kg)＝濃度X提純總ml數X1000/組織重(g)
[注意：測量時所用測量杯的寬度應是1cm，若杯寬為0.5cm，則所得光密度值應乘以2] 。由於光散射的影響，所測定的光密度大於病毒實際上的吸收光密度，因而存在誤差。因此，準確測定常常對測定的光密度進行校正(見附錄)。
附表：幾種植物病毒的消光係數(E值)和A260/A280值
病毒種類 E0.1%1cm260nm A260/A280
(TMV) 3 1 1 19
煙草花葉病毒 · ·
(CMV) 5 0 1 65
黃瓜花葉病毒 · ·
(TYMV) 9 6 1 51
蕪青黃色花葉病毒 · ·
Y (PVY) 2 8 1 28
馬鈴薯 病毒 · ·
X (PVX) 2 97 1 19
馬鈴薯 病毒 · ·
(TNV) 5 6 1 70
煙草壞死病毒 · ·
(TRV) 3 0 1 88
煙草脆裂病毒 · ·
(TEV) 2 4 1 27
煙草蝕紋病毒 · ·
(TRSV) 12 8
煙草環斑病毒 ·
S (PVS) 3 0
馬鈴薯 病毒 ·
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