一. 目的
DNA.RNA 的分離，純化及鑒定用的凝膠電泳有兩類，一類是瓊脂糖凝膠電泳,適用於0.2kb和小於30kb的核酸分離；另一類是聚丙烯酰胺凝膠電泳，適用於小於1kb的核酸分離。
核酸研究中瓊脂糖凝膠電泳是一種非常簡便、快速分離、純化和鑒定DNA和RNA的方法，通過本實驗掌握植物病毒RNA的電泳分離技術，了解電泳中凝膠濃度、核酸分子大小及構象、電泳緩衝液和電壓與分離效果的密切關係。
二.實驗材料
各種提純病毒RNA、病葉總RNA或dsRNA。
三.實驗用儀器及藥劑
穩壓穩流電源;水平電泳槽;核酸紫外燈或凝膠成像分析儀;
電泳緩衝液：Tris-硼酸(5 ×TBE)液：Tris108g ，EDTA9.3g（配成0.5MPH8.0 的母液），硼酸55g，溶於1000ml.pH8.2，長期保存，用時稀釋。
凝膠加樣緩衝液(10 ×):0.25%溴酚蘭(BPB),40%(W/V)蔗糖水溶液，4℃保存。
溴化乙錠(EB)染色液:10mg/ml溶於水
四.實驗步驟
(一)瓊脂糖凝膠製備
1.1%濃度瓊脂糖膠:據凝膠板大小計算凝膠液總量，稱取瓊脂糖粉，溶於0.5 × TBE電泳緩衝液中
2.置沸水浴或微波爐中加熱至沸騰，至少2次，以使瓊脂糖充分溶解
3.冷卻至55-60℃左右加入溴化乙錠(EB)，濃度為0.5ug/ml，充分混勻
4.在膠床開口的兩端用膠布或膠紙封好，確保倒膠不漏，置水平台麵上
5.梳子固定在小凹槽內,，梳子平麵與膠床底麵垂直，梳齒前端和膠床底麵留有0.5～1mm間隙
6.將凝膠倒入膠床中，床高3～5mm，30分鍾～1小時後膠凝固，撕掉膠布
7.將膠床置於電泳槽中，加入1×電泳緩衝液，緩衝液的量以超出凝膠表麵1～2mm為宜，小心地拔出樣品梳子，樣品孔自然充滿緩衝液，如樣品孔內有殘留氣泡應除去
(二)上樣與電泳
1.RNA樣品中加入0.1-0.2倍體積10X凝膠加樣緩衝液，混勻後用微量移液器吸取樣品點入樣品孔中，同時加已知分子量的參照樣品。
2. 電泳時靠加樣孔的一頭接負極（黑色），打開電源開關，電壓調至所需伏數(小於5V/cm)，當染料顏色移至適宜位置處足夠分離目的核酸時(0.5-2小時左右)停止。
3. 電泳完畢，將電泳儀電壓調回到零位後關電源，從膠床上取下凝膠置紫外檢測儀上(波長254nm)或在凝膠成像分析儀上進行觀察、分析，並記錄結果。
照相:在相機上加紅色濾色鏡光圈放到4～5.6,用21NID膠卷,速度約在0.5～2分鍾間。
4.分析病毒核酸組分並根據照片測算核酸分子量，以及核酸質量和濃度。
注意:EB有誘變作用及中性毒性，操作時應帶手套或充分注意。RNA 電泳所用試劑應專用，防止RNA酶降解。
上一篇：直接提取病毒侵染病株中dsRNA
下一篇：紫外分光光度法測定提純病毒的濃度
