一. 目的
植物ssRNA病毒在在植物體內增殖中，通過核酸互補而形成一種堿基配對的dsRNA，還有一些病毒核酸是dsRNA 。這類雙鏈核酸在健康植物體內一般是不存在的。因此，檢測dsRNA的存在可以達到診斷病毒侵染的目的，並根據不同病毒的dsRNA 電泳圖譜的差異來區分不同的病毒。該方法易行、快速、操作簡單、不需要昂貴的儀器。分離出來dsRNA還可用於RT-PCR、核酸雜交和cDNA合成。
二 實驗材料
TMV、CMV或其它病毒等侵染的新鮮或冰凍葉片。
三.實驗用儀器及藥劑
高速離心機，真空幹燥儀，微量移液器，50mL和1.5mL離心管，磁力攪拌器
CF-11 纖維素（Whatman ），10XSTE緩衝液(0.5MTris-HClPh6.8 ，1MNaCl ，10mMEDTA) ， 10%SDS ， 純 化 皂 土 ， 飽 和 苯 酚 ， 氯 仿/ 異 戊 醇 (24∶1) ， 3MNaAc(pH5.2)，100%和70%的乙醇，滅菌蒸餾水。
四.實驗步驟
程序（一）：
1.取適量病毒侵染病葉(5-7克)於研缽內，加液氮研磨成細粉末，倒入三角瓶中
2.融化後加入2倍的2XSTE抽提緩衝液（W/V ）、10%SDS至終濃度為1XSTE和2%的SDS，必要時加純化皂土
3.加等體積飽和苯酚，置搖床或磁力攪拌器上振蕩混合30-60分鍾
4.8000rpm，離心20分鍾
5.取上清，加等體積氯仿，混合抽提10分鍾（此步可略去）
6.10000rpm，離心10分鍾
7.取上清水相，加無水乙醇至終濃度為15-18%，加2~3%（V/W ）的CF11，攪拌30分鍾
8.12000rpm，離心3-5分鍾,棄上清
9.沉澱加入1XSTE （含16%乙醇），振蕩1-5分鍾
10.12000rpm，離心3-5分鍾,棄上清
11.重複9.10步驟2-3次
12.沉澱加入5mL1XSTE,振蕩懸浮1分鍾
13.12000rpm，離心3-5分鍾,取上清
14.重複12.13步驟1次，合並上清
15.加1/10體積3MNaAc，2.5倍體積冷無水乙醇，混勻、置-20℃下2小時以上
16.12000rpm，離心15分鍾，沉澱用70%乙醇洗兩次
17.真空幹燥,3～5分鍾
18.沉澱溶於適量滅菌重蒸餾水或STE中,-20℃保存
程序（二）：
7.取上清水相，加無水乙醇至終濃度為15-18%，
8.稱取2.5gCF11，加入30Ml1XSTE/16%乙醇，製備纖維素柱
9.將樣品液加在柱子頂部過柱
10.用1XSTE （含16%乙醇）100-120mL充分洗柱
11.用5mL1XSTE洗脫第1次，棄掉洗脫液
12.用5mL1XSTE洗脫第2次，收集洗脫液
13.再用5mL1XSTE洗脫第3次，收集洗脫液
14.合並後兩次收集的洗脫液
其餘步驟同程序（一）。
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