酶聯免疫吸附技術（Enzyme-Linke Immunosorbent Assay; ELISA）是把抗原、抗體的免疫反應和酶的高效催化反應有機地結合而發展起來的，是用酶作為標記物或指示劑，進行抗原或抗體定性 、定量測定的綜合技術。
與其他植物病毒的血清學檢測方法相比較，ELISA的突出優點在於：1. 靈敏度高，檢測濃度可達 1－10ng/ml。2. 專化性強、重複性好。3. 快速、結果可以在幾個小時內得到。4. 檢測對象廣，一般不受抗原形態的影響。5. 適用於處理大批樣 品。6. 具有自動化及試劑盒的發展潛力。
ELISA 從種類上可歸為“直接”和“間接”兩種。直接法就將抗原吸附在一個固相上，用 酶標記特異抗體直接檢測；間接法就是先用沒標記的特異抗體於固相上的抗原結合，采用標記的“第二抗體”（即抗特異抗體的結合物) 或 A 蛋白為結合物測抗原。這兩種方法都是將抗原本身通過靜電吸引結合在固相上（即抗原包被）， 或被事先吸附在固相上的特異抗體或抗體片段選擇誘捕。
ELISA 實驗有多種方法：直接法（Direct method)；間接法(Indirect method)；雙抗夾心法（Double antibody sandwich method); 酶標 A 蛋白雙抗夾心法；酶抗酶(Enzyme-anti-enzyme method) ；異種動物抗體雙夾心法；青黴素 (Penicillinase)酶係統；生物素（Biotin)- 親和素（Avidin) 酶係統等。
一. 目的
ELISA 試驗方法是用於檢測植物病毒最廣泛的血清學方法之一。之中，首選的為雙抗體夾心法（DAS ），靈敏度及專化性都令人滿意。在 ELISA中免疫專化性通過相結合的酶與合適的底物反應表現出來。通過本實驗掌握最典型的雙抗體夾心法的原理及技術。
二.實驗材料及用具
1.ELISA 板，聚苯乙烯（PVC ）板均可用，板孔根據酶標儀設計程序采用40 孔或96 孔。
2.特異性抗體免疫球蛋白IgG 或F（ab ＇)2 。
3.酶標記抗體免疫球蛋白IgG(用HRP 或ALP 酶標記）。
4.感染病毒的病株及健康植株。
5.微量取液器（40－200 μl 可調，1000ul 可調，20ul 可調）；洗瓶。
6.酶聯免疫檢測儀。台式離心機。冰箱。
7.包被緩衝液；洗滌緩衝液；IgG 稀釋緩衝液；底物溶液；鄰苯二胺（OPD）；過氧化氫（H2O2 ）；2M 硫酸。
8.10ml、200ml 量筒；5ml、10ml、100ml、500ml 燒杯；50ml 三角瓶；100ml、500ml 容量瓶；研缽；記號筆；小塑料袋；2-5ml 可調洗滌瓶。
三.緩衝液的配製
1.磷酸緩衝液：用0.02MPBS（pH7.4 ），可以配成0.1M，用時稀釋5倍使用。
2.洗滌緩衝液：用 0.02MPBS 緩衝液（pH7.4)及 Tween20 配製。PBS－Tween 緩衝液＝1000mlPBS+0.5mlTween20。
3.包被緩衝液：0.05M 碳酸鹽緩衝液（pH9.6) 。4℃保存。
4.酶標抗體稀釋緩衝液：1000mlPBS-T+1％牛血清白蛋白（BSA ）
5.底物溶液：磷酸－檸檬酸緩衝液（pH5.0)
6.終止液：2－4mol/LH2SO4
四.實驗步驟(用辣根過氧化物酶(HRP)標記抗體IgG 步驟)
1.包被抗體：在酶聯板每孔中加入 200 μl 適宜濃度特異性抗體免疫球蛋白液(用包被緩衝液稀釋：0.1MpH9.0 碳酸鹽緩衝液)。加蓋以防蒸發，置 37℃下孵育 2－4 小時或4℃下過夜。
2.洗滌、封閉：甩淨孔中溶液，用 PBS －Tween(0.02MpH7.4 磷酸緩衝液＋Tween-20)衝洗反應孔，室溫靜置3－5 分鍾後再衝洗，共重複三次。注意排除氣泡。
3.加待檢的抗原標樣：每孔加 200 μl 待測樣品，同時設陽性、陰性及空白對照。抗原稀釋液為PBS－T 液。加蓋4℃下孵育過夜或37℃4－6 小時。
4.洗滌：方法同上，重複三次。
5.酶標記抗體：每孔加入適宜濃度的特異性酶標記抗體 IgG200 μl,30℃下孵育 3－6 小時(酶標記抗體稀釋液為PBS－T＋0.1％牛血清白蛋白)。
6.洗滌：方法同上，重複三次。
7.加底物溶液：加入 200 μl 新配製的底物液，室溫下孵育 0.2-1 小時或直至顯色到所需程度。
8. 終止反應：用 50 μl 適當的終止液終止反應。如底物為OPD( 或TMB) ，則用2MH2SO4終止。底物為pNPP用3MNaOH終止。
9.觀察結果：用肉眼觀察顏色反應，並以顏色深淺記錄+++，++，+，±，-或用酶聯檢測儀測定(O.D)吸收值。判斷結果。
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