免疫雙向擴散反應是在半固態基質(瓊脂膠)中的沉澱反應，具有簡便和直接應用血清的優點，並可由沉澱線的形成特點分析病毒間的關係。但受病毒粒子形態的影響，使用有局限性，更適用於球形病毒，同時也有靈敏度不高的缺點。
1.實驗材料和用具
(1)抗血清
(2)係統感染病毒的植株和健康植株。
(3)生理鹽水、0.025M磷酸緩衝液(PB)，pH7.2 ，3 ％SDS(十二烷基硫酸鈉)、10％NaN3(疊氮鈉)、精製瓊脂粉(或瓊脂糖粉)。
(4)塑料培養皿、打孔器、滴管、吸管、微量離心管、量筒、三角瓶、50℃熱水浴。
2.實驗步驟
(1)取1g瓊脂粉(依瓊脂質量可在0.5-1.5g之間)加入100ml PB煮至瓊脂完全融化(對光看，無顆粒狀物)，加1ml 10％NaN3，加蒸餾水補足至100ml，放在熱水浴中待用。
(2)將融化的瓊脂倒入塑料或玻璃培養皿約2mm 厚(8.8cm直徑的培養皿中約放20ml) ，室溫下放置30分鍾使凝固。倒瓊脂液時注意保持液麵水平，凝固前避免移動。
(3)製備病毒樣品，如為球形病毒，1g葉組織加1ml緩衝液研磨；如為長條病毒，1g葉組織加1ml緩衝液再加1ml 3％SDS研磨。將汁液放入微量離心管中3000轉離心2分鍾備用，根據需要，半提純樣品液也可作為樣品。
(4)用生理鹽水稀釋抗血清為三個濃度1 ∶2，1 ∶4，1 ∶16。
(5)用打孔器在凝固的瓊脂板上打孔，可有各種大小及排列形式，常用為2-5mm直徑和梅花狀排列,用鑷子,針頭或抽吸器去掉孔中凝膠。
(6)加樣時可因實驗的目的不同而有不同的組合方式，常用的為中心孔加抗血清,周圍孔加抗原及健株對照,加樣量以滿麵而不溢出為度。
(7)25℃下保存孵育24-48小時，觀察沉澱線的形成，記錄結果。
上一篇：植物病毒的二次提純
下一篇：病毒鑒定—微量免疫電泳
