一. 目的
不同濃度和穩定性的病毒可用各種方法及步驟作進一步提純。操作過程中應注意對提純病毒的產量、侵染力和粒子完整性（長條病毒）的影響。
本實驗應用蔗糖密度梯度離心對實驗四中所得的粗提產品作進一步提純，學習了解各步驟操作方法和超速離心機的使用。
二、操作步驟
1．製備蔗糖梯度柱用BECKMAN離心機SW28型轉頭的離心管製備33ml的梯度柱。
2．加樣2-3ml。
3．超速離心，25,000轉，4℃2小時。
4．取病毒帶後加入2倍容量的緩衝液稀釋。
5．超速離心，30號轉頭，45,000轉，4℃1.5小時。保留沉澱。
6．每管0.5—1ml緩衝液再懸浮，即為病毒提純產品。
7 ．用雙光束雙波長分光光度計分別作粗提純和精提純懸液320—220nm光譜吸收圖，比較二者的吸收峰和A260/280值的差別。
注意：①．上樣前的粗提懸液應保證一定的濃度，才能在密度梯度離心中形成病毒帶。②．使用不同型號轉頭時加樣量不同，並應換算離心力和轉速。③．最後的超速離心沉澱應為無色半透明。
三、蔗糖梯度柱的手工製備
根據所用的轉頭和離心管決定梯度柱的容量。
①．用0.01M ，pH7.0 磷酸緩衝液分別配製10 ％、20 ％、30 ％和40 ％的蔗糖液(W/W)。
②．以BECKMANSW28轉頭的離心管按7ml(10％)、7ml(20％)、8ml(30％)和8ml(40％) 的比例由低濃度開始加入管中。用10ml注射器和長針頭將蔗糖液依次注入離心管底部，最後加3ml50％(W：W)的蔗糖墊，形成由上至下，濃度由低到高的梯度柱，放置12—15小時後使用。
操作時注意不要搖動離心管；注入蔗糖液時動作要慢；放置時間不可過長或過短。
四、上樣
不同大小的梯度管上樣量不同，SW28型轉頭的梯度離心管加樣2-3ml 。加樣時用注射器從管壁與液麵成45—46o角傾斜緩緩加入，針頭高出液麵2—3mm，也可用吸管或滴管加樣。
五、取樣
1、如有可見帶，可用注射器和端部彎成直角的注射針頭取出。
2 、如無可見帶，由液麵開始用微量取樣器順序取樣，每管1ml分別測定A260和A280值，選A260/A280 比值最接近標準者合並並作超速離心。
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