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結核病實驗室細菌學診斷研究



錄入時間:2011-10-28 9:17:34 來源:互聯網

         (1)BactecTB460和:BactecTB960分枝杆菌快速培養儀  這是於1977年問世、20世紀90年代初引進我國的BactecTB460分枝杆菌快速培養儀,利用放射性14℃棕櫚酸為基底物的7H 12B液體培養基培養結核分枝杆菌(簡稱MT)時,由於細菌的生長產生放射性C02,其放射性強度與MT的生長相關,檢測標本中的MT隻需4-25天。此外,在Bactec係統內加入戶-硝基-o-乙酰氨基書-羥基苯丙酮(簡稱NAP)繼續培養2+6天後,根據生長指數可初步鑒別MT複合群和非結核分枝杆菌(簡稱NTM)Bactec TB460以其簡便、快速、可同時報告藥敏試驗結果的優點,;在國內外已成為結核病診斷的標準參照係統之一。 

    1996年新研製出BactecTB960分枝杆菌全自動快速培養儀功能與BactecTB460相似,但無放射性汙染,在專用的7H9培養管中加入含有:RUTHENIUM熒光的底物,當檢測標本經前處理接種於該培養管後,如有分枝杆菌存在,其代謝產物激發底物RUTHENIUM產生熒光,經掃描自動顯示以生長指數(G1)表示的測定結果。但Bactec儀器價格昂貴,需專門進口廠家的專利液體培養基,費用較高,而難以在普通實驗室廣泛開展。 

    (2)分枝杆菌L  是分枝杆菌在藥物等因素作用下產生的細胞壁缺陷型,常規塗片、培養通常陰性,是分枝杆菌病遷延不愈、難治、複治的重要原因。分枝杆菌L型在體內誘導、體外誘導均獲成功,如應用氨苄西林、環絲氨酸、異煙肼、利福平、乙胺丁醇或甘氨酸加溶菌酶等均已得到成功的誘導。在結核病標本中開展L型檢查[如塗片、培養和聚合酶鏈反應(PCR)],可顯著提高診斷的陽性率,指導臨床進行有效化療。 

    (3)噬菌體生物擴增法  其原理是活的MT可保護菌體內的噬菌體免受噬菌體殺滅劑作用。先將MTMT噬菌體共同孵育,使噬菌體侵人MT內,再用抗結核藥物處理MT,若MT耐藥,則細菌能存活,隨後加入殺噬菌體藥物,位於菌體內部的噬菌體不被殺死。培養後,若有耐藥MT存在時會出現噬菌斑。該方法與傳統藥敏試驗方法符合率高,隻需3天時間即可直接檢測標本,無需特殊儀器,操作簡單。 

    (4)噬菌體生物發光法  分枝杆菌噬菌體40或分枝杆菌噬菌體88是在分枝杆菌噬菌體TM4的非必需區插入含蟲熒光素酶表達基因Fflux與卡介苗hsp60啟動子的融合體。重組噬菌體進入相應的分枝杆菌體內繁殖,同時在hsp60啟動子的作用下,Fflux基因表達蟲熒光素酶,通過與體外發光係統中的熒光素作用而發光,檢測發光的強度即可間接對噬菌體進行定性分析和定量分析,從而檢測分枝杆菌活菌數。噬菌體生物發光法對分枝杆菌具有高度的特異性,發光值較高,而對非分枝杆菌的發光值與陰性對照比較差異無顯著性;在含抗結核藥物的培養基中,噬菌體對耐藥株的發光值比對藥物敏感株的發光值高。應用該方法檢測分枝杆菌和進行藥敏試驗僅需3天,但不能鑒別致病分枝杆菌與非致病分枝杆菌。 

 

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