微波爐融化培養基靈敏度的檢查

摘 要：目的 驗證微波爐融化的培養基是否符合微生物限度檢查的要求。方法 以2005年版中國藥典中的檢查方法為依據，檢查微波爐融化培養基的靈敏度。結果 微波爐融化培養基生長的菌落數與對照培養基生長的菌落數基本一致，靈敏度檢查合格。結論用微波爐融化培養基做微生物限度檢查是可行的。

關鍵詞：微波爐融化；培養基；靈敏度；微生物限度檢查

裝於試管瓶內的成品固體培養基使用前需融化，融化過程中需保證培養基的營養成分不會因過度加熱而受影響。宜選用沸水浴或微波爐融化培養基。沸水浴融化培養基相對安全，但裝量較大的培養基要融化均勻充分，需延長加熱時間。微波爐融化培養基則具有快速的優點。本實驗檢查了微波爐融化培養基的靈敏度。 

1 材料與儀器 

1.1 儀器設備  儀器名稱、型號、廠家見表1。

表1 儀器名稱、型號、廠家

1.2  用具

培養皿，三角瓶，吸量管，接種針，試管。

1.3 培養基

營養瓊脂培養基(090414)、玫瑰紅鈉瓊脂培養基(090211)、營養肉湯培養基 (080402)、改良馬丁培養基 (090203)、改良馬丁瓊脂培養基(071018)(北京三藥科技開發公司)；大豆酪蛋白消化物瓊脂培養基 (20081127)、沙氏葡萄糖瓊脂培養基 (20090320) (青島高科園betway必威西汉姆联生物技術公司)。

1.4 試劑

0.9％無菌氯化鈉溶液。

1.5 菌種

培養基靈敏度檢查所用的菌種傳代次數不得超過5代。金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) [CMCC(B)26003]；大腸埃希菌 (Escherichia coli) [CMCC(B)44102]；枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63501]；白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98001]；黑曲黴(Aspergillus niger) [CMCC(F)98003]。

1.6 菌液製備

接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鮮培養物至營養肉湯培養基中，30～35℃培養18-24 h；接種白色念珠菌的新鮮培養物至改良馬丁培養基中，23～28℃培養24~48 h。將培養物用0.9％無菌氯化鈉溶液製成每1 mL含菌數50～100cfu(菌落形成單位 )的菌懸液。接種黑曲黴的新鮮培養物至改良馬丁瓊脂斜麵培養基中，23～28℃培養5～7 d，加入0.9％無菌氯化鈉溶液3～5mL，洗脫孢子。然後，用管口裝有薄的無菌棉花或紗布，能過濾菌絲的無菌毛細吸管吸出孢子懸液至無菌試管內，用0.9％無菌氯化鈉溶液製成每1 mL含孢子50～100 cfu的孢子懸液[2]。具體稀釋、計數操作如下。 

取1 mL培養物或孢子懸液加入0.9％無菌氯化鈉溶液9 mL中，搖勻，即得10-1菌懸液，取其l mL加入0.9％無菌氯化鈉溶液9 mL中，搖勻，即得l0-2菌懸液。依此類推，製得10-3，10-4，10-5，10-6，10-7菌懸液。分別吸取10-4，10-5 或10-6，10-7菌懸液各1 mL加入平皿中，倒入營養瓊脂或改良馬丁瓊脂培養基，凝固後倒置培養。每個稀釋級分別製備2個平行平板。白色念珠菌、黑曲黴培養72 h計數；大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌培養48 h計數。每種菌均用每1 mL含菌50～100 cfu的稀釋級做培養基靈敏度檢查實驗。

2 微波爐融化的培養基靈敏度檢查

2.1  營養瓊脂培養基、大豆酪蛋白消化物瓊脂培養基的靈敏度檢查

取金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢杆菌菌懸液各1 mL，分別注入無菌平皿中，立即傾注由微波爐融化完全並冷卻至45℃的營養瓊脂培養基、大豆酪蛋白消化物瓊脂培養基，每株實驗菌平行製備每種培養基2個平皿，混勻，凝固，30～35℃培養48h，計數。同時用相應的對照培養基(培養基靈敏度檢查合格，121℃，15 min滅菌，冷卻至45℃進行實驗 。

2.2  玫瑰紅鈉瓊脂培養基、沙氏葡萄糖瓊脂培養基的靈敏度檢查

取白色念珠菌、黑曲黴各1 mL，分別注入無菌平皿中，立即傾注由微波爐融化完全並冷卻至45℃的玫瑰紅鈉瓊脂培養基、沙氏葡萄糖瓊脂培養基，每株實驗菌平行製備每種培養基2個平皿，混勻，凝固，20-25℃培養72 h，計數。同時用相應的對照培養基(培養基靈敏度檢查合格，121℃，15 min滅菌，冷卻至45℃)進行實驗。

表2培養計數結果及比值（1）

注：每種培養基的上列數據為微波爐融化，下列數據為121℃，15min滅菌。

表3 培養計數結果及比值（2）

注：同表2

3 結果判斷標準

微波爐融化培養基的菌落平均數與對照培養基的菌落平均數的比值大於70％，且菌落形態大小與對照培養基上的菌落一致，則判定該培養基靈敏度檢查合格，微波爐融化程序符合規定。

4 結果與討論

各種菌的培養計數結果及驗證結論見表2，表3。

從表2、表3可見，微波爐融化的培養基和培養基靈敏度檢查合格，並經過121℃，15 min滅菌冷卻至45℃的對照培養基檢測細菌、黴菌及真菌，計數結果基本一致，比值均大於7O％。表明微波爐融化的培養基靈敏度檢查合格，用微波爐融化的培養基進行微生物限度檢查是可行的。

參考文獻

[1] 汪穗福．微生物檢測驗證技術[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2005：68—69．

[2] 國家藥典委員會．中國藥典2005年版二部 川．北京：化學工業出版社，2005：附錄ⅪJ．

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