革蘭氏染色法不僅用來觀察細菌的形態，而且它還是細菌鑒定的重要方法，它可將全部細菌區分別革蘭氏陽性菌和陰性菌兩大類。革蘭氏染色法的步驟為：塗片→固定→結晶紫色染色→水洗→碘液媒染→水洗→酒精脫色→番紅複染→水洗→幹燥→觀察。
塗片 與單染色法相同。
固定 與單染色法相同。
結晶紫染色 染色1分鍾，然後水洗並用吸水紙吸幹。
碘液媒染 染色1分鍾，然後水洗並吸幹。
酒精脫色 用95%酒精脫色，直到酒精不出現紫色時即停止（大約半分鍾），然後立即水洗，並吸幹。
番紅複染 染色3分鍾左右，然後水洗並吸幹。
鏡檢 在顯微鏡油鏡頭下觀察，菌體顯藍紫色的為革蘭氏陽性菌；菌體顯紅色的為革蘭氏陰性菌。
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