2.3 人工汙染樣品檢測結果
純菌汙染樣品檢測結果：用單增李斯特菌
單增李斯特菌和非李斯特菌混合汙染樣品檢測結果：將單增李斯特菌和非李斯特菌10-3～10-8 混合菌液汙染牛奶和豬肉後，國標檢測結果表明，這4種培養基上都可以檢測出單增李斯特菌，說明非李斯特菌存在時，HKListeria、CHROMagarListeia、OXA、MMA仍可以達到相同的效果，非李斯特菌對單增李斯特菌沒有太大影響。單增李斯特菌、英諾克和非李斯特菌混合汙染樣品檢測結果：當單增李斯特菌和英諾克按100 cfu：10 cfu混合汙染牛奶和豬肉後，按國標法4種培養基都可檢出單增李斯特菌，在HKListeria和CHROMagar Listeia上呈現藍色帶暈環菌落，英諾克呈現藍色無暈環菌落，其他雜菌基本不長，在OXA和MMA上單增李斯特菌和英諾克都分別呈現黑色和藍白色菌落，二者無法區分；當單增李斯特菌和英諾克按10 cfu：10 cfu和10 cfu：100 cfu比例混合時，HKListeria和CHROMagar Listeia上隻有英諾克生長，單增李斯特菌和其他非李斯特菌均未生長，表明英諾克存在時對單增李斯特菌檢測有一定影響。
2.4 實際樣品檢測
實際樣品檢驗結果如表4。62份實際樣品共檢出李斯特菌15份，其中豬肉檢出英諾克4株，格式李斯特2株；雞肉檢出單增李斯特菌1株，英諾克3株，格式李斯特2株；魚肉檢出英諾克2株；牛肉檢出英諾克1株；其他樣本未檢出。陽性樣品在4種培養基上檢測結果符合率為100％ 。HKListeria、CHROMagar Listeia的檢測效果優於OXA、MMA，能夠區分單增李斯特菌和其他李斯特菌。表4 實際樣品中李斯特菌檢測結果
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樣品 |
HKListeria |
CHROMagarListeria |
OXA |
MMA |
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豬肉（19份） |
6（31.6%） |
6（31.6%） |
6（31.6%） |
6（31.6%） |
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牛肉（5份） |
1（20%） |
1（20%） |
1（20%） |
1（20%） |
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雞肉（17份） |
6（35%） |
6（35%） |
6（35%） |
6（35%） |
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魚肉（10份） |
2（20%） |
2（20%） |
2（20%） |
2（20%） |
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熟食（3份） |
0 |
0 |
0 |
0 |
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蔬菜（4份） |
0 |
0 |
0 |
0 |
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蛋糕（4份） |
0 |
0 |
0 |
0 |
括號中表示同一類樣品中陽性樣本的檢出率
3 討論
利用顯色培養基鑒定細菌是一種新的快速檢測方法，通過在培養基中加入細菌特異性酶的顯色底物，直接觀察菌落顏色就可對菌種作出鑒定 。在HKListeria和CHROMagarListeria顯色培養基上，單增李斯特菌呈現藍色帶暈環的菌落，其他李斯特菌呈現藍色不帶暈環的菌落。金黃色葡萄球菌、蠟樣芽胞杆菌、糞鏈球菌等雜菌或被抑製或沒有暈環，菌落形態與單增李斯特菌有明顯區別。
在本試驗中，對單增李斯特純菌液、單增李斯特和非李斯特菌混合菌液的檢測結果表明，HKListeria、CHROMagar Listeria上單增李斯特菌的檢出率與對照平板TSA—YE沒有明顯差異，說明HKListeria和CHROMagar Listeria對單增李斯特菌基本沒有抑製作用；人工汙染樣品和實際樣品檢測結果表明，HKListeria和CHROMagar Listeia具有更高的檢測效率，可根據菌落顏色和形態直接對單增李斯特菌作出鑒定，而OXA、MMA上生長的菌落還需進一步生化鑒定才能確定結果。因此，HKListeria和CHROMagar Listeria具有較高靈敏度、特異性和選擇性，是非常有價值的分離平板，可為食品微生物的快速檢測提供有力幫助。
另外，試驗中還發現，當樣品中英諾克數量高於單增李斯特菌時，單增李斯特菌不能夠有效地檢出。Restaino L等人也曾有類似的報道，英諾克數量高時容易造成單增李斯特菌檢測結果的假陰性。分析可能是英諾克在增菌過程中生長過快，數量過多，對單增李斯特菌產生了一定的競爭或抑製作用。因此，在使用顯色培養基檢測單增李斯特菌時，要特別注意英諾克的幹擾問題。
作者：張淑紅 ，吳清平，張菊梅
作者單位：廣東環凱微生物科技有限公司，廣州 510070；2．廣東省微生物研究所 廣東省菌種保藏與應用重點實驗室，廣州 510070
[參考文獻]
[1]鬱慶福，蔡宏道，何曉青，等．現代衛生微生物學[M]．北京：人民衛生出版社，1995．116—117．
[2]陳太基，袁寶君．單核增生性李斯特菌檢測方法的應用驗證[J]．江蘇預防醫學，2002，13(4)：6l一62．
[3]吳清平，周豔紅，蔡芷荷．衛生微生物特異性顯色培養基的研究與應用[J]．中國衛生檢驗雜誌，2005，15(1)：124—126．
[4]Restaino L，Frampton EW，Schabert G．Isolation and detection of Listeria monocytogenes using fluormogenic substrates for phosphafidylinositol specific phospholipase C[J]．Food Prot，1999，62(3)：244—248．
[5]Manail M．Fluorogenic and chromogenic enzyme substrates in culture media and identification tests[J]．Int J Food Microbiol，1996，31(3)：45—58．
