噬菌體培養法

1. 將指定之寄主細菌以液體培養法於適當溫度下培養，一般培養16~24小時

2. 將噬菌體原液100 μl 與寄主細菌懸浮液300 μl均勻混合，靜置15分鍾使其感染。

3. 將混合液接至含10 ml新鮮液體培養基的試管中，於適當溫度下振蕩培養約8~24小時，培養時間依噬菌體之不同而異。

4. 將培養液移入離心管中，以10,000 rpm (5,000 g)離心10分鍾，以沉澱寄主細菌。

5. 將上清液移至新管中，以0.22μm孔徑之過濾器(filter)去除殘餘菌體，即得不含寄主細菌之噬菌體原液。但因噬菌體原液呈透明狀，無法以肉眼直接判斷其增殖效果，故應測定其效價以確認增殖培養之成效。

二. 雙層瓊脂培養法

1. 將指定之寄主細菌以液體培養法於適當溫度下培養，一般培養16~24小時。

2. 將噬菌體原液100 μl 與寄主細菌懸浮液300 μl均勻混合，靜置15分鍾使其感染。

3. 將混合液加入5 ml 冷卻至45℃的0.7﹪瓊脂培養基中，均勻混合後立即平鋪在已倒好的1.8﹪瓊脂培養基平板上。

4. 待平板凝固後移至適當溫度之培養箱中，一般培養8~24小時，培養時間依噬菌體之不同而異。

5. 以上述相同之步驟製作另一不含噬菌體之對照組。

6. 將培養好的平板與對照組比較其澄清度，一般含噬菌體之平板呈澄清狀，而僅含寄主細菌之對照組則呈混濁狀。

7. 將含有噬菌體之平板置於 -20℃下4~5小時後，取出置於室溫下解凍。

8. 將解凍後產生的液體移入離心管中，以10,000 rpm (5,000 g)離心10分鍾以沉澱寄主細菌。

9. 將上清液移至新管中，以0.22 μm孔徑之過濾器(filter)去除殘餘菌體，即得不含寄主細菌之噬菌體原液。

三. 表麵瓊脂培養法

1. 將指定之寄主細菌以液體培養法於適當溫度下培養，一般培養16~24小時。

2. 將寄主細菌懸浮液3 ml均勻平鋪於1.8﹪瓊脂培養基平板上，靜置2小時。

3. 將餘的寄主細菌懸浮液吸出，再將噬菌體原液0.3 ml均勻塗抹於平板上。

4. 於適當溫度下培養約16~24小時，培養時間依噬菌體之不同而異。

5. 取5 ml 新鮮液體培養基加入平板中，以 L 形玻棒刮洗下平板表麵之菌體。

6. 將刮洗下之液體移入離心管中，以10,000 rpm (5,000 g)離心10分鍾以沉澱寄主細菌。

7. 將上清液移至新管中，以0.22 μm孔徑之過濾器(filter)去除殘餘菌體，即得不含寄主細菌之噬菌體原液。