【關鍵詞】 除菌過濾器；缺陷假單胞菌；微生物截留；無菌保證程度
除菌過濾器在藥品生產中主要用於無菌藥品的除菌過濾，除菌過濾是藥品生產過程中非常重要的一種除菌方式，特別是對非最終滅菌的注射劑而言，除菌過濾是消除藥液中微生物的唯一方法。通過對除菌過濾器濾芯材質的選擇、滅菌方法、完整性測試以及細菌的截留試驗，確認除菌的效果，提高除菌過濾在注射劑生產過程中無菌保證程度重要性的認識。
1 材料與方法
1.1 試驗材料
(1)濾芯：濾膜材質為聚醚碸，10英寸226卡式，孔徑：0.22 μm，級別：除菌級，濾膜麵積：3 600 cm2。來源：頗爾過濾器(北京)有限公司。(2)全自動過濾器完整性測試儀：上海先維過濾設備廠，型號：212A。(3)甘露醇：廣西南寧化學製藥有限公司，批號：0809110，配置20 kg 濃度為0.5%的水溶液。(4)微生物指示劑：缺陷假單孢菌(ATCC19146直徑0.3～0.4 μm)，北京鑫四環消毒技術開發中心。(5)菌液濃度：每平方厘米應達到107個菌的挑戰水平。(6)培養基：硫乙醇酸鹽流體培養基：北京三藥科技開發公司，批號:081111；營養瓊脂：廣東環凱微生物科技有限公司，批號:200902081；營養肉湯：廣東環凱微生物科技有限公司，批號:200901071。(7)試驗壓力：約為0.2 Mpa。(8)試驗流量：筒式過濾器2～3.86L/(m3·min)。
1.2 方法
將濾芯浸泡於0.1%氫氧化鈉溶液中12～24 h，取出用注射用水反複衝洗至衝洗水的pH值呈中性。
將過濾器與完整性測試儀連接，向經過注射用水充分浸潤的過濾器(含濾芯)中通入壓縮空氣，觀察壓力表讀數的變化，當浸入液麵下的導管出口處出現第1個氣泡時，讀取壓力表指示值，此壓力值即為濾器濾芯的起泡點壓力，壓力要求≥0.31 Mpa。
取缺陷假單胞菌的新鮮培養物少許，接種至營養肉湯培養基中，於(32.5±2.5)℃培養18～24 h，活菌計數將上述培養物用0.9%無菌氯化鈉溶液製成含菌<100 CFU/mL的菌液，稀釋級別：107，計數結果：27 CFU/mL。
(1)過濾係統滅菌：將試驗所需的不鏽鋼桶、矽膠管、過濾器及濾芯等置於脈動真空滅菌器中於121 ℃滅菌30 min。(2)對照試驗：取1 000 mL甘露醇溶液(0.5%)用無菌過濾器壓濾，各取2份樣品，分別用薄膜過濾法處理後，一份作陰性對照，另一份在最後1次衝洗液中加入缺陷假單胞菌菌液1 mL(<100 CFU/mL),取濾膜置於硫乙醇酸鹽流體培養基中培養作為陽性對照，對照試驗培養(33 ℃,14 d)均符合規定。(3)截留試驗：將缺陷假單胞菌液360 mL加入餘量0.5%甘露醇溶液中攪拌均勻，取1 mL按中國藥典2005年版2部附錄Ⅺ J微生物限度檢查法進行檢查，計數過濾前液體的微生物數量。然後將菌液全部用過濾器濾過，取1 000 mL按過濾前藥液微生物數量檢查法同法操作，計數過濾後的液體的微生物數量。計算被過濾液體過濾前的微生物數量(N0)與過濾後的微生物數量(N)比的常用對數值,即：LRV=1gN01gN=7.8。(4) 過濾後濾器的完整性測試將過濾之後的除菌濾器再次進行起泡點測試，確認試驗過程中濾膜的完整性。
2 結果
藥液過濾前的微生物的數量與藥液過濾後的微生物數量比的常用對數值為7.8，大於標準規定值7，結果見表1。證明除菌級濾芯可達到每平方厘米107個菌的截留效果，完全符合非最終滅菌注射劑的生產工藝要求。表1 微生物截留試驗結果（略）
3 討論
除菌過濾器微生物截留試驗結果表明，孔徑為0.22 μm除菌級濾芯對微生物的截留試驗可達到LRV大於7的微生物截留效果，達到除菌的目的。但是與其他滅菌方法相比，除菌過濾的風險最大，實際生產中宜安裝第2隻已滅菌的除菌過濾器再過濾1次藥液，最終的除菌過濾器應盡可能接近灌裝點。因此，對於采用除菌過濾和無菌生產工藝生產的注射劑產品，在除菌過濾時，被過濾產品總的微生物汙染量應控製在規定的限度內。要達到這一目的，應在無菌控製的環境下進行過濾操作，相關的設備、包裝容器、膠塞及其他物品應采用適當的方法進行滅菌，並防止再次汙染。對生產用原輔料還應進行微生物限度的檢查，以降低其微生物負載率，通過整個生產過程的嚴格控製，采用經驗證確認的除菌過濾和無菌生產的工藝，產品的無菌是能夠得到保證的。
作者：劉春燕，吳清剛，黎李，陳豔
【參考文獻】
1 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(2部)［M］.北京:化學工業出版社，2005.附錄：9394,169170.
2 國家食品藥品監督管理局.藥品生產驗證指南［M］.北京:化學工業出版社,2003.123130.
3 蘇德模,馬緒榮.藥品微生物學檢驗技術［M］.北京:華齡出版社,2007.300311.
