【摘要】 目的用不同菌種發酵和用纖維素酶預處理溪黃草，初步探討發酵對溪黃草抑菌效果影響的機製，為開發廉價的食品添加劑，抑菌藥物和節約藥材資源提供新的研究途徑。方法對溪黃草進行發酵等處理後，檢測其醇提物的抑菌作用。結果微生物發酵對溪黃草抑菌效果存在一定的影響，酵母發酵能明顯提高抑菌效果，與用纖維素酶處理的效果相似。結論利用合適菌種發酵提高藥材有效成分的利用率是可行的。
【關鍵詞】 發酵； 溪黃草； 抑菌效果
溪黃草係唇形科香茶菜屬植物Rabdosia serra (Maxim.)Hara，由於和中藥大辭典上所收錄的中藥溪黃草的原植物線紋香茶菜Rabdosia striatus (Benth.) Kodo外形相似而常作溪黃草入藥，而且是廣東藥材市場上中藥溪黃草的主流品種之一，用於清熱利濕、涼血散瘀，治療急性黃疸性肝炎、急性膽囊炎等［1］。
目前關於溪黃草抑菌效果方麵的研究，主要考慮將溪黃草的提取物作為一種健康的食品添加劑。姚勇芳［2］研究了溪黃草中抑菌物質的最佳提取條件，並驗證了溪黃草的乙醇提取物對大腸杆菌具有抑製作用，對黴菌抑製效果不明顯；戰宇等［3］研究了溪黃草提取物的抑菌效果；梁盛年等［4］測定了溪黃草乙醇提取物的體外抗菌活性；段誌芳等［5］還證實溪黃草水提物對楊桃果實具有一定的保鮮作用。
發酵法一直是中藥炮製方法之一，隨著科學技術的發展，發酵法應用範圍更加廣泛。這種方法借助微生物的作用，改變中藥原有藥性，提高療效，降低毒副作用，擴大適應症［6，7］。本研究以枯草杆菌、乳酸菌和酵母菌為發酵菌種，研究發酵後的溪黃草醇提物對細菌和黴菌生長的抑製效果，為高效提取溪黃草抑菌有效成分，大規模生產高效、低毒、廣譜而經濟實用的食品防腐劑、抑菌藥物以及對於循環利用和處理每年藥廠大量廢棄的藥渣提供了新的途徑和方法。
1 材料
溪黃草購自梅州市溫記百草堂，經嘉應學院生命科學學院廖富林教授鑒定為Rabdosia serra (Maxim.)Hara。美樂多購自梅州市太平洋商場。幹酵母粉, 廣東丹寶利酵母有限公司 。 枯草杆菌、JY-LZ乳酸芽孢杆菌、大腸杆菌、白葡萄球菌、黑曲黴、青黴菌保藏於嘉應學院生命科學學院實驗室。纖維素酶（綠色木酶），酶活力>15μ/mg，上海伯奧生物科技有限公司。
2 方法
2.1 工藝流程溪黃草→粉碎→稱取5 g→加入水或培養基→高壓滅菌(121℃，20 min)→按10%接種量接種發酵菌種→於培養箱中靜止10 d→提取→測定抑菌活性。
2.2 發酵
乳酸芽孢杆菌培養基：酵母膏1.0％；蛋白腖1.0％ ；葡萄糖1％；磷酸氫二鉀0.05%；硫酸鎂0.1%；硫酸錳0.05%；pH7.0；121℃濕熱滅菌20 min。
酵母菌培養基：去皮馬鈴薯20%，葡萄糖2%，蒸餾水配製，121℃濕熱滅菌30 min。
乳酸芽孢杆菌培養基：酵母膏1.0％；蛋白腖1.0％ ；葡萄糖2.5％；磷酸氫二鉀0.05%；硫酸鎂0.1%；硫酸錳0.05%；pH7.0；121℃濕熱滅菌20 min。
美樂多乳酸菌培養基：雀巢脫脂奶粉2%；葡萄糖1%；蒸餾水配製；121℃濕熱滅菌15 min。
酵母菌培養基：去皮馬鈴薯20%，葡萄糖2%，蒸餾水配製，121℃濕熱滅菌30 min。
發酵：將枯草杆菌係列，乳酸芽孢杆菌係列，美樂多乳酸菌係列置於(36±1)℃的恒溫培養箱中靜置10d，幹酵母菌係列於(28±1)℃的恒溫培養箱中靜置10 d。
2.3 抑菌物質的提取稱取5 g的溪黃草置於3角瓶中，加入30 ml 95%的乙醇，於70℃的恒溫水浴鍋中水浴2 h後，濾紙過濾，取濾液，將其於同溫度的水浴鍋中揮幹濃縮至稠膏狀，再加入95%的乙醇溶解並定容至10 ml。定容後放入冰箱中保藏備用。
發酵後的4個係列4 800 r/min離心20 min，固形物按上法處理。
纖維素酶處理及抑菌物質提取：分別稱取纖維素酶0.010 8 g和0.031 0 g，加入含5g溪黃草和30ml蒸餾水的三角瓶中，加入後放入55℃的恒溫水浴鍋中，水浴2 h後取出，濾紙過濾，濾渣按上法處理。
2.4 抑菌活性的檢測指示菌種活化後用無菌生理鹽水製成106～107 cfu/ml菌懸液。
取0.2 ml菌懸液塗布於牛肉膏蛋白腖或PDA培養基上，靜置10min。
待測樣品用無菌毛細吸管吸取管長的1/3後，滴於直徑為5 mm的無菌濾紙片上，每個平板上貼3片，分別做兩個平行。95%乙醇作對照。
將貼了濾紙片的平板放入恒溫培養箱中，靜置30 min後倒置培養，大腸杆菌和白葡萄球菌培養24 h取出，黑曲黴和青黴培養48h後取出，用遊標卡尺測量其抑菌圈直徑。
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