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DNA提取的材料、設備及試劑



錄入時間:2011-9-5 10:08:59 來源:丁香園

 

  一、材料

  含pBSE. coli DH5α或JM係列菌株,1.5ml塑料離心管(又稱eppendorf),離心管架。

  二、設備

  微量取液器(20μl,200μl,1000μl),台式高速離心機,恒溫振蕩搖床,高壓蒸汽消毒器(滅菌鍋),渦旋振蕩器,電泳儀,瓊脂糖平板電泳裝置和恒溫水浴鍋等。

  三、試劑

  1LB液體培養基(Luria-Bertani) :稱取蛋白腖(Tryptone)10 g,酵母提取物(Yeast extract) 5 gNaCl 10 g,溶於800ml去離子水中,用NaOH調pH7.5, 加去離子水至總體積1,高壓下蒸氣滅菌20分鍾。

  2LB固體培養基:液體培養基中每升加12g瓊脂粉,高壓滅菌。

  3、氨苄青黴素(Ampicillin, Amp)母液:配成50mg/ml水溶液, -20保存備用。

  4、溶菌酶溶液:用10mmol/L TrisCl(pH8.0)溶液配製成10mg/ml,並分裝成小份(1.5ml)保存於-20,每一小份一經使用後便予丟棄。

  53mol/l NaAc (pH5.2)50ml水中溶解40.81g NaAc3H2 O,用冰醋酸調pH5.2, 加水定容至100ml, 分裝後高壓滅菌,儲存於4冰箱。

  6、溶液Ⅰ:50 mmol/L 葡萄糖,25 mmol/L Tris.Cl (pH8.0)10mmol/L EDTA (pH8.0)。溶液Ⅰ可成批配製,每瓶100ml,高壓滅菌15分鍾,儲存於4冰箱。

  7、溶液Ⅱ:0.2 mol/L NaOH (臨用前用10mol/L NaOH母液稀釋)1SDS

  8、溶液Ⅲ:5 mol/L KAc 60ml,冰醋酸11.5mlH2O 28.5ml,定容至100ml, 並高壓滅菌。溶液終濃度為: K+ 3mol/L, Acˉ5mol/L

  9RNAA母液:將RNAA溶於10mmol/L TrisCl(pH7.5), 15mmol/L NaCl,配成10mg/ml的溶液,100加熱15分鍾,使混有的DNA酶失活。冷卻後用1.5ml eppendorf管分裝成小份保存於-20

  10、飽和酚:市售酚中含有醌等氧化物,這些產物可引起磷酸二酯鍵的斷裂及導致RNADNA的交聯,應在160用冷凝管進行重蒸。重蒸酚加入0.1%的8-羥基喹啉(作為抗氧化劑),並用等體積的0.5mol/L TrisCl (pH8.0)0.1mol/L TrisCl(pH8.0)緩衝液反複抽提使之飽和並使其pH值達到7.6以上,因為酸性條件下DNA會分配於有機相。

  11、氯仿:按氯仿:異戊醇=24:1體積比加入異戊醇。氯仿可使蛋白變性並有助於液相與有機相的分開,異戊醇則可起消除抽提過程中出現的泡沫。  按體積/體積=1:1混合上述飽和酚與氯仿即得酚/氯仿(1:1)。酚和氯仿均有很強的腐蝕性,操作時應戴手套。

  12TE緩衝液:10 mmo/L TrisCl (pH8.0)1 mmol/L EDTA (pH8.0)。高壓滅菌後儲存於4冰箱中。

  13STET0.1 mol/L NaCl10mmol/L TrisCl(pH8.0)10 mmol/L EDTA (pH8.0)5% Triton X-100

  14STE0.1mol/L NaCl10mmol/L TrisCl(pH8.0)1mmol/L EDTA (pH8.0)

  15、電泳所用試劑:(1TBE 緩衝液(5×):稱取Tris 54g,硼酸27.5g,並加入0.5M EDTA (pH8.0) 20ml,定溶至1000ml。(2)上樣緩衝液(6×)0.25% 溴酚藍,40% (w/v) 蔗糖水溶液。

 

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