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病毒學實驗技術(4)



錄入時間:2011-8-10 8:45:17 來源:百度

 

常用溶液的配製

(一)胰蛋白酶溶液  以漢克斯液配製,其濃度因胰蛋白酶牌號而定。一般說來,Difco牌用0.27%,E·Merk牌用0.75%,新疆生化所產品用0.5%,其它牌號要經試驗確定。按量將胰蛋白酶加入漢克斯氏液後,置3720分鍾使其完全溶解,濾器除菌(不能加溫,更不能高壓)無菌檢查合格後置-20保存,用前加適量的3.5%或1.4 NaHCO3使其pH7.67.8。此液供消化細胞用。

(二)漢克斯(Hank’s)氏液,亦稱亨克氏液;

原液甲一:

NaCl                     160g    

MgSO4·7H2O             2g

KC1                      8g      

MgC12·6H2O              2g

按順序加入到800m1雙餾水中一物溶解後再加另一物。

原液甲二: CaC12  2.8g溶於 l00 ml雙餾水中。

以上兩液混合,加雙餾水至1000 ml,加2ml氯仿防腐,保存於5

原液乙一:

N aH2PO4·12H2O          3.04g 

KH2PO4                   1.20g

葡萄糖                    20g

按順序加入到800ml雙蒸餾水中。

原液乙二:0.4%酚紅液100 ml0.4%酚紅液是將0.4g酚紅置乳缽中,邊研磨邊徐徐滴加入0.1NNaOH 11.28ml, 酚紅應完全溶解,置於100ml量杯中,最後加雙蒸餾水達100 ml)。

將酚紅液與葡萄糖等混合液混合,加雙蒸餾水至1000ml)加入2ml氯仿防腐,保存於5

按下方配成漢克斯氏液,原液甲1份、原液乙1份、雙餾水18份,910分鍾滅菌,此液在5下可保存1個月。

用前以1.4 NaHCO3910分鍾滅菌過),無菌操作,校正pH7.4(根據需要而定),大約每20ml的漢克斯氏液加入0.5ml的碳酸氫鈉可達pH7.4,此時顏色應是黃紅色。

 

(三)厄爾(Earle)氏液

原液甲:

NaCl                        68g         

NaHCO3                    22g

KCl                      4g          

葡萄糖                       10g

NaH2PO4·2H2O             1.4g            

雙蒸餾水                     1000ml

原液乙:

CaCl2                         2g         

MgCl2·6H2O                1.7g

雙蒸餾水                      500ml

使用時按下方配即成厄爾氏液:原液甲2份、原液乙1份、雙餾水17份,濾器過濾,無菌檢查合格後,保存5下備用。保存期1個月。

(四)供組織培養用的磷酸鹽緩衝鹽水(簡稱PBS):

NaCl                          8g            

Na2HPO4                     1.15g

KC1                        0.2g         

KH2PO4                      0.2g

CaCl2                          0.1g          

MgCl2·6H2O                 0.1g

雙蒸餾水                       1000ml

濾器過濾,此液pH7.3,保存於5。當有沉澱發生時,不能供組織培養用。

下列供其它用途的磷酸鹽緩衝液,不能用於組織培養,注意區別。

1 NaCl                     7.65g     

KH2PO4                     0.21g

Na2HPO4                    0.724g       

蒸餾水                    1000ml

此液PH7.2

2 NaCl                     8.5g          

NaH2PO4·2H2O              0.22g

Na2HPO4                    1.2g         

蒸餾水                    1000ml

(五)乙二胺四乙酸二鈉(簡稱EDTAC10H14O6N2Na2·2H2O)溶液

乙二胺四乙酸二鈉         0.05g      

Na2HPO4                    0.288g

KH2PO4                     0.55g

NaCl                    2g      

KCl                         0.05g 

雙蒸餾水                250ml

910分鍾滅菌,4下保存備用,可代替胰蛋白酶溶液來消化傳代細胞。

(六)5%乳蛋白水解物  5g乳蛋白水解物加入雙餾水100ml,待其完全溶解後,裝瓶,910分鍾滅菌,冷後置4保存。亦可用漢克斯氏液直接配成0.5%的溶液便於應用,但不宜長時間保存。

 

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