雞胚接種
（一）雞蛋選擇和孵化 選健康無病雞群的新鮮受精蛋。雞胚對所要接種的病毒應無免疫力，因為其抗體可由母雞經卵黃而傳給胚胎。以來航雞蛋或其它白殼蛋為好，因為白殼蛋照蛋時較易於觀察。孵化時以孵卵箱較好，培養細菌的溫箱也可以用，但和孵小雞一樣，特別要求溫度、翻蛋和濕度適當相對濕度為60％左右，所用溫度和孵小雞相似，但最低可用36℃，一般37.5℃，高可到38.5℃，每日翻蛋最少3次，開始可以將雞蛋橫放，要接種的前兩天立放，氣室向上，接種前兩天特別注意雞胚位置，希望近中央，不要過分偏在一邊，胚胎偏在一邊易死亡。接種前兩天若發現過分偏在一邊，照蛋後將偏在一邊的胚胎朝下放，可以矯正到雞胚趨向中央。
孵化三、四天，可用照蛋燈在暗室觀察，雞胚發育處的血管即明顯可見。沒有雞胚發育也無血管的是未受精蛋。有雞胚但雞胚固定一處不動且血管消散呈暗紅色者是死胚。活的雞胚，血管及其主要分枝均明顯，呈鮮紅色，雞胚可以活動。實驗室接種用的雞胚最小是6日齡，最大是12、13日齡。此時雞胚構造如圖20-2所示。
（二）接種前準備
1．病毒的接種材料事先應經無菌檢驗，即接種到一管硫羥代乙酸肉湯（或肉湯、熟肉培養基各一管）不生長。要達到材料無菌，可采取以下措施：
（1）所取材料應無菌，處理（如研磨、離心取上液等）過程中也無細菌汙染；
（2）如所取材料已汙染，可在每ml材料中加青黴素和鏈黴素各達1000～5000單位（常用1000～2000單位），置室溫中1小時或冰箱中12～24小時處理。或經濾器除菌。
2．照蛋，以鉛筆劃出氣室、胚胎的位置，若要做卵黃囊接種或血管注射，還要劃出相應的部位。
3．用碘酒在接種處的蛋殼上消毒，並在該處開孔。
（三）雞胚接種方法 雞胚接種的方法很多，此僅列舉其中較常用的一些方法。同時，當列舉的接種途徑有幾種技術時，也僅選擇其中最廣泛應用的一種。圖20-3
1．卵黃囊（Yolk sac）接種：大型的原生小體性病毒和立克次氏體易在卵黃囊膜內生長。雖然許多較小的病毒也可用卵黃囊途徑接種，但這些病毒主要侵害胚胎本身並在胚胎組織內增殖，而不是侵害卵黃囊組織和在其中增殖。
（1）日齡和準備 孵化5～7天的雞胚較為適用，因為此時的卵黃囊較大。在檢蛋燈上檢蛋，並用鉛筆畫出氣室的邊緣。氣室部分的蛋殼稱為殼帽，待碘酊幹後，在天然氣室的正中處用鑽鑽一個孔。
（2）接種和孵育 應用裝有2.54cm長的8號針頭的注射器，將針頭全長穿過殼帽上的孔直向下插（與雞蛋的長軸平行），並把接種物注入卵黃囊內。通常接種0.2～0.5ml。隨後用石蠟——凡士林混合物封閉蛋殼孔，並將雞蛋置37℃孵育。
（3）收獲程序 收獲時將蛋直立於蛋盤內。用無菌鑷子打碎蛋殼，並將殼帽除去。將暴露的膜撕去，並用去掉了嘴的滅菌10ml吸管吸取卵黃。如需收獲卵黃囊膜，可將蛋內容物迅速傾於一個滅菌平皿內。卵黃囊常在操作時破裂。卵黃囊呈深黃色，易於識別。用無菌鑷子將卵黃囊與絨毛尿囊膜分開，並與胚胎剝離，迅速移置於一個滅菌平皿內。如欲收獲雞胚胎，可用彎頭牙科探針鉤住胚胎的頸部取出之，並用無菌剪刀剪去附著的膜後移置於滅菌平皿內。
2．尿囊腔（Allantoic carity） 接種流感病毒和新城疫病毒以及引起呼吸道感染的其他多數病毒都易在尿囊壁的內胚層細胞內生長，並釋出於尿囊液中。腦脊髓炎病毒和流行性腮腺炎病毒在用這個途徑接種時也易增殖。
（1）日齡和準備 取孵化8～11天的雞胚，檢蛋，並用鉛筆畫出氣室邊緣。將蛋直立，氣室向上。在雞蛋的側麵離氣室底上方幾毫米、絨毛尿囊膜發育良好處選好一點。用碘酊消毒該點及其周圍部分，在蛋殼上用鑽鑽一個孔或用針穿刺一個孔。
（2）接種和孵育 取一長1.3cm的7號針頭，接在吸有接種物的小注射器上，通過蛋殼上的鑽孔，與雞蛋長軸平行地或者呈一定角度地將針插入尿囊腔內。每個蛋注射0.2～0.5ml的接種物。隨後用熱的石蠟—凡士林混合物封閉蛋殼上的鑽孔。將蛋置37℃孵育。
（3）尿囊液的收獲 為使收獲時不致因出血而有血液流到尿囊液內，可在收獲前將雞胚置冰箱內冷藏4～6小時。將雞胚直立放置並用無菌鑷子除去氣室上的蛋殼、暴露氣室底。氣室底由敷覆在絨毛尿囊膜上的內殼膜構成。用一把彎頭小剪將這些膜撕去。為了便於采集尿囊液，可置入一把鑷子，使其尖端朝向蛋殼，將胚胎擠向一側。此時即可應用5或10 ml滅菌吸管吸取尿囊液。
3．絨毛尿囊膜（Chorioallantoic membrane）接種
（1）日齡和準備 取9～11日齡的雞胚，檢蛋，並用鉛筆在血管最豐富處的蛋殼上畫出一個lcm2的區域,應用5％石炭酸消毒蛋殼，待其幹燥。不用碘酊消毒，因為酒精溶液可經蛋殼吸收，並在絨毛尿囊膜上產生病變，可能被誤認為是由病毒引起的。用鑽子沿蛋殼上的鉛筆線鑽開。必須十分小心，切勿弄破內殼膜。隨後在天然氣室上，象上述卵黃囊接種法那樣的鑽孔或刺孔。將蛋平放，使鑽開一小塊蛋殼的一側向上。用尖頭鑷子或牙科探針輕輕地將已鑽開的蛋殼取去。此時暴露出內殼膜，它的下麵就是絨毛尿囊膜。滴上一滴無菌生理鹽水，使內殼膜軟化。取一長約0.64cm的7號針頭連接於l個lml注射器上，使針頭尖的斜麵以45°角接觸這個已軟化的內殼膜部分，稍稍向下一壓，即可因牽引而在內殼膜上造成一個裂縫。必須注意不要損傷下層的絨毛尿囊膜。因為內殼膜的纖維斜向行走，所以應使注射器與雞卵長軸呈45°角，這樣向下一壓，就可將纖維分離而不撕斷。隨後用橡皮球在天然氣室的鑽孔上吸氣。也可以在吸氣前先在裂縫上滴加一滴滅菌鹽水。吸入的鹽水可以幫助絨毛尿囊膜與內殼膜分開。當部分雞蛋內容物向原來的天然氣室部分轉移時，絨毛尿囊膜即塌落。絨毛尿囊膜與內殼膜分離和絨毛尿囊膜塌落的證據，就是內殼膜變為透明。
（2）接種和孵育 用一支連接7或8號針頭的1ml注射器，小心地將針頭經內殼膜的裂縫插入，滴加0.1～0.2ml接種物於絨毛尿囊膜上。嚴格的操作應在檢蛋燈上進行，以保證接種物確實滴在絨毛尿囊膜上，而不是穿透了絨毛尿囊膜。接種後，將雞蛋稍行搖動，使接種物均勻擴散於絨毛尿囊膜表麵。蛋殼的開口用一小塊橡皮膏封閉。繼續孵育，使蛋殼窗向上。
另一個接種方法可以不開蛋殼窗，方法如下：在已消毒的蛋殼上選好部位鑽孔，達內殼膜。用一6號針頭，使針頭尖的斜麵向下，在鑽孔的周圍小心地稍稍下壓針頭，將內殼膜與蛋殼分開。隨後將蛋放在檢蛋燈上，並在已經鑽好的氣室孔上吸氣。當時即可清楚地見到絨毛尿囊膜的塌落。
（3）膜組織的收獲 將蛋平放，蛋殼窗向上。用碘酊棉球消毒蛋殼窗周圍，撕去橡皮膏。用滅菌鑷子除去周圍蛋殼，暴露出絨毛尿囊膜。用鑷子將膜夾住，並用剪刀剪下後迅速移置於一個滅菌平皿內。
因為9或10日齡的雞胚的絨毛尿囊膜牢固地粘連於內殼膜上，所以一個通用的方法是在雞胚7、8日齡時就使絨毛尿囊膜塌落，隨後繼續孵育，直至準備接種時為止。接種操作需在檢蛋燈上進行，以保證此時絨毛尿囊膜不上升，而且接種物確實是放在絨毛尿囊膜上而不是在尿囊腔內。隨後用石蠟—凡士林混合物或橡皮膏封閉蛋殼孔。此後按第一法所述方法進行孵育和收獲。
4．羊膜（Amniotie）接種 此法主要用於由咽喉洗嗽液中分離流感病毒。由於雞胚在發育過程中吞咽羊水，並將其中所含的病毒攜帶至呼吸道和腸道組織，病毒主要在這些組織內增殖。腦脊髓炎病毒也可通過羊水腔途徑進行分離。
（1）日齡和準備 用7～15日齡的雞胚，檢蛋，確定胚胎位置，隨後根據胚胎位置在雞蛋的側麵、氣室上方蛋殼的相應位置上選點並標記。按常法處理後，象卵黃囊接種那樣鑽孔。
（2）接種和孵育 接種時應用lm1注射器，連接一個長約1.8cm的7號針頭。將蛋平放於檢蛋燈上，插入針頭，並緩慢地向胚胎方向刺入。刺破羊膜囊時的一個證據，就是胚胎發生一個突然運動。隨後稍將針頭回抽，並注入0.1～0.2ml接種物。蛋殼上的鑽孔用石蠟—凡士林混合物封閉，將蛋直立，繼續孵育。
（3）羊水的采集 象尿囊腔和卵黃囊收獲方法那樣除去蛋殼。在氣室底上滴加幾滴生理鹽水，使膜透明。以胚胎的眼睛作為參考依據，用連接一個短的6號針頭的注射器吸取羊水。
5．其他
（1）靜脈內 這一雞胚接種方法實際上不常用。操作時應用12～14日齡的雞胚。以檢蛋法標記出一根大靜脈。如前述方法除去該靜脈上方的一小塊四方形蛋殼。滴加1小滴滅菌礦物油於內殼膜上，使其變為透明。將一連接在小注射器上的4號針頭順血流方向插入於靜脈內。隨後注入0.1～0.5ml的接種物。如前述，孵育並收獲。
（2）腦內 這是培養狂犬病毒時偶而使用的方法。
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