一、病毒診斷用病料的采集
病毒分離用生物學材料的最理想的采集時期,是在機體尚未產生抗體之前的疾病急性期。
各種病料,例如血液、鼻咽拭子、糞、尿、膿汁、水泡液、皮膚病變、脊髓液和活體穿刺材料以及剖檢時采取的組織,均可用於病毒分離。每個具體疾病需要采取什麽樣的生物標本,可參考有關疾病的敘述,特別是其診斷部分。
有一些總的規則適用於病毒分離用的組織的正確選擇。呼吸道疾病在急性期,通常在鼻或咽分泌物排出病毒。在痘病的水泡液中或痂皮內也可發現病毒。許多全身性卡他性疾病具有病毒血症期,易於由血液中分離到病毒。實際上急性發病期間,機體的所有分泌物中都含有病毒。與中樞神經係統有關的疾病較特殊,但也可由血液或病死動物的腦內分離病毒。采取組織標本時一個最為重要的注意事項,就是必須在動物死亡後立即進行——必要時可撲殺瀕死動物,就更有利於病毒分離。同時應采取該動物血液作血清學試驗,在冰凍前必須先從全血中分離血清,因為溶血標本經常不再能做某些血清學試驗。
各種病毒的生物物理學和生物化學特性明顯不同。許多病毒對熱及酸敏感,故在采集材料時必須特別注意。尤其是必須采取新鮮材料,並立即置
組織標本應以無菌器械在無菌條件下采取。如果想要了解組織中的病毒分布,則必須應用分開的器械采取每個組織。經常應用緊蓋的滅菌旋帽瓶子貯存可疑的組織和液體。如將液體標本瓶放入幹冰內,則應緊蓋瓶塞,因幹冰的氣相就是CO2,CO2可因改變液體的pH值使不耐酸的病毒滅活。如果瓶蓋漏氣,則將其放入密封的塑料袋內也可達到目的。
二、包涵體的檢查
用狂犬病腦切片的內基氏(Negri)小體或其他包涵體標本片示教。若有狂犬病的病料組織,可用清潔的玻片作觸片,幹燥後置甲醇中固定,以姬姆薩氏染液染1小時,水洗,幹燥,鏡檢。
通常可用塞勒(Seller)氏染色法檢查狂犬病的包涵體。
(一)塞勒氏染液配製
1.先配好1%美蘭(即亞甲藍)的純甲醇溶液和1%堿性複紅(即堿性一品紅)的純甲醇溶液。兩液分別置瓶中加塞塞緊後,於冷處可長期保存。
2.用前將兩份美蘭液與一份複紅液混合,即為塞勒氏染液。用前試驗,以神經組織間質染成淡紅色為妥,若紅色過淺酌加複紅液,紅色過深酌加美蘭液。
(三)結果 狂犬病包涵體在神經組織的胞質中,嗜酸性,呈櫻桃紅色。嗜堿性組織與細胞核呈深藍色,神經細胞質呈藍紫色,間質呈粉紅色,神經纖維呈桃紅色,神經鞘不著色。
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