一、實驗目的：掌握發酵罐的操作技能，學習微生物在發酵罐上發酵的過程和實驗方法。
二、儀器
分光光度計、電熱恒溫水浴鍋、生物發酵智能控製係統。
三、試劑
1、DNS試劑：取6.3g3,5-二硝基水楊酸（DNS）和262mL2mol/LNaOH溶液加到酒石酸鉀鈉的熱溶液中（192g酒石酸鉀鈉溶於500 mL水中），再加5g重蒸酚和5g亞硫酸鈉，攪拌使其溶解，冷卻後加水定容至1000mL，保存於棕色瓶中放置7天後使用。
2、10 g/L酪素溶液
3、種子培養基
4、產酶培養基
四、實驗方法
1、學習發酵罐的使用方法。
2、發酵罐中加入培養基，滅菌。
3、接種、培養。
4、測定酶活:
a. 先將酪素溶液放入（40±0.2）攝氏度恒溫水域中，預熱5 min；
b. 按下列程序操作：
試管A（空白） （第二試管） 試管B（酶試樣，作三個平行樣）（第三試管）
↓ ↓
加酶液2.00 mL （移液管2ml） 加酶液2.00 mL
↓（40±0.2℃），2 min ↓（40±0.2℃），2 min
加三氯乙酸4.00 mL（搖勻）（移液管5ml） 加酪素2.00 mL（搖勻）
↓（40±0.2℃），10 min ↓（40±0.2℃），10 min
加酪素2.00 mL（搖勻）（移液管2ml） 加三氯乙酸4.00 mL（搖勻）
↓ ↓
取出靜止10 min，過濾 （第四試管，小漏鬥） 取出靜止10 min，過濾
↓ ↓
在275 nm波長下，用 10 mm 在275 nm波長下，用 10 mm
比色皿測其吸光度 比色皿測其吸光度
（5）計算（=135）
X=A×K×8/2×1/10×n×E=2/5×A×K×n×E
式中 X——樣品的酶活力（u/g） A——試樣溶液的平均吸光度
K——吸光常數（K=135） 8——反應試劑的總體積（mL）
2——吸取酶液2.00 mL，以1 mL計 1/10——反應時間10 min，以1 min計
n——稀釋倍數 E——紫外法與福林法的換算係數（取0.50）
五、實驗進程安排及結果分析
（1）第1次實驗：在實驗老師準備的已滅菌培養基和罐體的前提下，觀察罐上接種。同時熟悉罐的結構及每一部件用途。
（2）第2次實驗：在下搖瓶測定發酵液中蛋白酶活力的同時，每位同學在發酵罐上取樣，測定發酵液中蛋白酶活力。
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