酵母菌的形態觀察及死細胞、活細胞的鑒別

 

　　酵母菌是多形的、不運動的單細胞微生物，細胞核與細胞質已有明顯的分化，菌體比細菌大。繁殖方式也較複雜，無性繁殖主要是出芽生殖，僅裂殖酵母屬是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通過接合產生子囊孢子。本實驗通過用美藍染色製成水浸片，和水-碘水浸片來觀察生活的酵母形態和出芽生殖方式。美藍是一種無毒性染料，它的氧化型是藍色的，而還原型是無色的，用它來對酵母的活細胞進行染色，由於細胞中新陳代謝的作用，使細胞內具有較強的還原能力，能使美藍從藍色的氧化型變為無色的還原型，所以酵母的活細胞無色，而對於死細胞或代謝緩慢的老細胞，則因它們無此還原能力或還原能力極弱，而被美藍染成藍色或淡藍色。因此，用美藍水浸片不僅可觀察酵母的形態，還可以區分死、活細胞。但美藍的濃度、作用時間等均有影響，應加注意。

 

　　釀酒酵母或卡爾酵母（Saccharomyces calsbergensis）；

　　0．05％、0．1％呂氏堿性美藍染液，革蘭氏染色用的碘液；

　　顯微鏡，載玻片，蓋玻片等。

 

　　1．美藍浸片觀察

　　(1)在載玻片中央加一滴0．1％呂氏堿性美藍染液，液滴不可過多或過少，以免蓋上蓋玻片時，溢出或留有氣泡。然後按無菌操作法取在豆芽汁瓊脂斜麵上培養48小時的釀酒酵母少許，放在呂氏堿性美藍染液中，使菌體與染液均勻混合。

　　(2)用鑷子夾蓋玻片一塊，小心地蓋在液滴上。蓋片時應注意，不能將蓋玻片平放下去，應先將蓋玻片的一邊與液滴接觸，然後將整個蓋玻片慢慢放下，這樣可以避免產生氣泡。

　　(3)將製好的水浸片放置3分鍾後鏡檢。先用低倍鏡觀察，然後換用高倍鏡觀察釀酒酵母的形態和出芽情況，同時可以根據是否染上顏色來區別死、活細胞。

　　(4)染色半小時後，再觀察一下死細胞數是否增加。

　　(5)用0．05％呂氏堿性美藍染液重複上述的操作。

 

　　2．水-碘浸片觀察

　　在載玻片中央滴一滴革蘭氏染色用的碘濃，然後再在其上加三滴水，取釀酒酵母少許，放在水-碘液滴中，使菌體與溶液混勻，蓋上蓋玻片後鏡檢。