單胞菌的人工感染與分離

 

熟悉單胞菌的形態特征及培養特點，魚類病原菌分離鑒定的基本方法，鞏固單胞菌所致魚病的基本特性及症狀。

 

單胞菌株純培養物普通瓊脂平板 鮮血瓊脂平板 普通肉湯 無菌蒸餾水 解剖刀 剪刀 鑷子 紗布 白瓷盤 潔淨的玻片 平皿 光學顯微鏡 一次性注射器 針頭 記號筆 酒精棉球 餌料 玻璃注射器水族箱 氣泵 控溫儀 吸管 洗耳球 滅菌試管 實驗用鯽魚 生理鹽水 溫度計 撈網

 

 

（ 1 ）普通肉湯培養基： 按以下劑量稱取各種試劑（先稱取鹽類再稱蛋白腖及牛肉膏），置於鋁鍋或搪瓷缸中。

牛肉膏 5g 磷酸氫二鉀 1g

蛋白腖 10g 蒸餾水 1000ml

氯化鈉 5g pH 7 . 4 ～ 7 . 6

 

初配好的培養基呈酸性故要用 NaOH 調整。將 pH 測定後的肉湯培養基用濾紙過濾，將過濾好的肉湯分裝試管、鹽水瓶、三角燒瓶等容器，待滅菌。

 

普通肉湯 1000ml

瓊脂 20g

 

瓊脂是由海藻中提取得一種多糖類物質，對病原性細菌無營養作用，但在水中加溫可融化，冷卻後可凝固。在液體培養基中加入瓊脂 1 . 5 ～ 2 ％即可固定培養基，如加入 0 . 3 ～ 0 . 5 ％則成半固體培養基。

 

將稱好的瓊脂加到普容肉湯中，加熱煮沸，待瓊脂完全融化後，將 pH 調至 7 . 4 ～ 7 . 6 。瓊脂融化過程中需不斷攪拌，並控製火力，不使培養基溢出或燒焦，並注意補充蒸發掉的水份。

 

加熱溶解好的培養基可用濾紙進行過濾，固體培養基要用 4 層紗布趁熱過濾（切勿使培養基凝固在紗布上），之後按實驗要求，將配製好的培養基分裝入試管或三角瓶中，包紮好待滅菌，將培養基置於高壓蒸汽鍋內， 121 ℃ 滅菌 15 ～ 30min ，趁熱將試管口一端擱在玻棒上，使之有一定坡度，凝固後即成普通瓊脂斜麵，也可直立，凝固後即成高層瓊脂。

 

鹽水瓶中的普通瓊脂已手掌感觸，若將瓶緊握手中覺得燙手，但仍能握持者，此即為傾倒平皿的合適溫度（ 50 ～ 60 ℃ ），每隻滅菌培養皿倒入約 15 ～ 20ml ，將皿蓋蓋上，並將培養皿於桌麵上輕輕回轉，使培養基平鋪於皿底，即成普通瓊脂平板。

 

培養基中的某種成分，如血清、糖類、尿素、氨基酸等在高溫下易於分解、變性，故應過濾除菌，再按規定的量加入培養基中。