微生物的保存技術（3）

 

4    傳代培養保存法 

 

        盡管與上述方法相比，用傳代培養保存法保存微生物的時間較短，且會使微生物在反複傳代和適應的過程中發生變異，但由於其簡便易行，加之一些不耐冷凍和幹燥處理的微生物還需要用該法保存，所以， 傳代培養保存法是所有使用微生物的單位都要采用的基本保存法。目前必須依靠傳代培養保存的微生物仍為數眾多。傳代培養保存法主要是保存生活態的微生物，它又分為連續用培養基傳代和連續用活宿主傳代。斜麵保存法和礦物油保存法是傳代培養保存的兩種最常用的方法。 

 

4.1   斜麵保存法 

 

        斜麵保存法是傳代培養保存法的具體方法，其優點是簡便，易於推廣。但用該法保存微生物的時間不太長。由於在具體操作時需要多次傳代，加之斜麵培養基中又保持了一定的營養條件，因此，用這種方法保存的微生物還易產生變異。使用該方法保存微生物時，可將菌種接種在不同成分的斜麵培養基上，培養至菌種充分生長後，放 4℃冰箱中保存。每隔一定時間進行接種培養後再行保存，如此連續不斷。一般細菌、酵母、放線菌和黴菌均可用此法保存。

 

4.2   礦物油保存法 

 

        礦物油保存法是傳代培養保存法的變相方法，也較簡單，且保存時間可達 1年以上。礦物油保存法，即是將接種在斜麵培養基的細菌經過培養後，加入滅菌的石蠟油並浸蓋住整個斜麵（ 覆蓋的深度為 2cm ） ，使之與空氣隔絕，以降低微生物的代謝率（ Gherna   1981） ，再將浸蓋有石蠟油的斜麵培養菌種置於約 4℃或室溫保存即可。複蘇的方法與常規再培養的方法類似。盡管這種方法可使保存的細菌 3年內不死，但不適於微生物的長期保存， 因為每隔幾年就必須複蘇、鑒定和再貯存，從而耗費人力和物力。黴菌、酵母菌和放線菌可用該法保存，一些不適於冷凍幹燥的微生物用該法保存也有效。 

 

5    砂土保存法 

 

        產芽孢的細菌或黴菌和放線菌的孢子均可用此法保存。具體操作如下： 

        用 60目和 120目篩除去砂和黃土中的大顆粒，分別用 10％鹽酸浸泡 2～4小時，再用水洗至中性，烘幹後按 2份砂:1份土的比例混勻，裝入小試管中高壓滅菌（至少 3次），並作無菌檢查，確認無菌後備用。在培養好的斜麵菌種中加入無菌水，做成細菌芽孢或黴菌和放線菌孢子懸液後，取出一 定量加入上述處理好的砂土管中，置真空幹燥器內，用真空泵抽幹後再將砂土管置入盛有氯化鈣幹燥劑的容器內，密封後低溫保藏即可。芽孢杆菌、產孢子的黴菌以及放線菌可用該法保藏 1～10年.少數微生物，如放線菌和一些生活在土壤中的產芽孢細菌能抵抗正常的冷凍操作，並保持活力和基因的穩定性。以 0～－20℃保存在營養培養基中的培養物，其細胞可存活 2年， 但一般認為這種細胞會被所形成的冰晶傷害。

        對某些短期保存的微生物而言，低溫保存不失 為一種廉價而有用的方法。室溫幹燥可使大量的微生物死亡（Gherna 1981） ，但有少數細菌能夠抵抗脫水幹燥並存活相當長的時間，產芽孢的細菌特別適用於這種貯存方法。幹燥保存法通常將微生物細胞轉種在一個滅菌的固體培養基上，然後在真空中脫水。土壤、紙張或陶製有孔培養基（Ceramic bead medium）常用於此類目的。

        還可先將細胞懸浮在明膠液內,再將這種明膠滴在真空中幹燥。一旦脫水，細胞必須保存在幹燥器內。如果再放到冰箱內保存，細菌的活力會保持得更長久些。用這種方法貯存的樣品複蘇後，要用營養培養基再水合和再次培養。該法常用於一些重要細菌屬（如根瘤菌）的保存。