齊-尼（Ziehl-Neelsen）抗酸染色法（操作）
【原理】
結核杆菌對苯胺染料不易著色，若加溫或延長染色時間使其著色後，再用3%鹽酸酒精處理也不易脫色，再經美蘭複染，結核杆菌及其他分枝杆菌仍呈紅色，而非抗酸菌和細胞雜質等呈藍色。
【材料】
1. 結核病人痰液：采取清晨第一口粘痰，或濃縮集落菌法處理過的痰標本。
2．抗酸染色液
3. 載物玻片、玻片夾、酒精燈、臘筆等。
【方法】
1. 無菌手續采取痰液塗片，自然幹燥，火焰固定。
2. 用臘筆將塗麵局部隔開，滴加石炭酸複紅染液，酒精燈上加熱至出現蒸氣。切勿沸騰，亦不可使染液幹涸。如有幹涸的趨勢，應及時補加染液。持續染色5-8分鍾，待冷後流水漂去多餘的染液。
3. 用3%鹽酸酒精清脫色，脫至塗麵無色為止，約1-3分鍾，自來水衝洗。
4. 滴加呂氏美蘭染液複雜30秒~1分鍾，水洗。自然幹燥或吸幹後油鏡檢查。
【結果】
1. 結核杆菌呈現細長，略有彎曲的紅色菌體，有的可表現出分枝特征，有的菌體表現有多數濃染顆粒。結核杆菌大多分散排列，亦可以見到有縱行條索狀排列。
2. 塗片染色能查到結核杆菌者，一般需要每毫升痰液內含菌量至少應有500個以上，甚至需達到5萬以上。故材料多進行濃縮集菌處理，以提高檢出陽性率，也造成在染色標本片觀察中，不一定每個視野都能看到結核杆菌。
3. 結核杆菌易發生變異，在陳舊培養基或臨床治療後標本材料中，結核杆菌往往菌體斷裂，或形成非抗酸性革蘭氏陽性的短杆狀、球狀顆粒，亦稱Much顆粒。
4. 標本已經高壓滅菌處理，不影響染色結果，也保證操作者的安全。
熒光染色法
此係用金胺熒光素染擴酸性細菌的方法，簡便易行，但不具特異性。
金胺染色法有多種、現列於後表，可選擇使用，應用熒光顯微鏡檢查結果。
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