生孢梭菌計數

 

菌懸液的濃度要求的確是每毫升小於100cfu，但是最好在50到100cfu之間，小於50的話容易出現假陰性。

 

其實無菌方法驗證中的菌懸液的製備也是依中國藥典（2005年版二部）附錄XI H無菌檢查法中“培養基靈敏度檢查”項下的方法，製備成小於100 CFU/ml的對照用菌液。所以無論你做什麽，菌懸液的製備方法都是一樣的。

 

具體方法就是，先把生孢梭菌在硫乙醇中培養24小時，然後吸取1毫升培養液用生理鹽水進行10倍稀釋，我的經驗是，稀釋到10的-7次方就是在100cfu以下了，然後取至少200ml的硫乙醇酸鹽培養基到試管裏（要求無菌），然後接種1ml製備好的菌懸液到硫乙醇試管裏，在32.5度下培養18h，然後開始計數。生孢梭菌在液體的硫乙醇裏會長成梭子一樣的單個菌落，這時拿的時候千萬不要震動，然後開始計數（一個單獨的“梭子”計一個菌落）。

 

注：如果培養時間太長會產生渾濁，不便於計數。如果震動試管也會渾濁。硫乙醇的量盡量大一點，這樣便於計數。