確定某一菌落中的細菌數量的方法

 

通常把細菌培養好後，離心，去除培養液，再加入生理鹽水重懸細菌。然後測分光光度計OD值，一般用固定的波值（我用波長540nm）。比色杯（口徑1cm)內放入一定量的生理鹽水（3000ul)，同樣的比色杯對照調零。取上麵細菌重懸液放入比色杯（3000ul)，測OD值，繼續加入細菌液直至測到0.1，記下所用的細菌懸液的總量（比如為100ul）。然後把細菌液連續進行10倍稀釋，每個稀釋倍數都取100ul輔瓊脂平板，培養20h後計數。

（1）計算細菌濃度

比如第6塊板（稀釋100000倍）的細菌數為100，推算原始菌液的濃度

100X10（隻取0.1ml）X100000=100000000/ml

（2）計算OD值與細菌濃度之間的係數

[（3000+100）/100]X係數=100000000

係數=3225806.4（這個係數算出來後是固定的，以後每次都用這個數）

[（3000+100）/100]是比色杯中細菌被稀釋的倍數，而這個被稀釋的細菌測到的OD值剛好為0.1，那麽以後每次你隻要將細菌液測其OD值=0.1，計算其所需的菌液的量，即可算出所含的細菌濃度。不用每次都輔板培養。

舉例說明：

在某一次你的菌液測其OD=0.1時，所需的量為150ul,

細菌濃度=[（3000+150）/150]X3225806.4=67741934 （CFU/ml）

這一方法，誤差不會太大。基本上是在一個數量級的範圍內。

 

有兩點要注意：

（1）測OD值要準（包括對儀器、比色杯的要求）

（2）如果細菌傳代培養較多次、或菌種保存時間長了，係數每隔一段時間要重新測。否則不準。一般1月重輔板培養測一次係數。如果是第一次做，建議做兩次以求準確。