一、 製備感受態的菌液收集時間：
1、準確測定OD值：OD在1.2～1.5之間。
1） 為了準確測定OD值，建議將菌液稀釋不同濃度測定（1、2、4、8、16倍稀釋，看其OD值是否呈線性關係）。每個倍數做3－5個重複，應該可以大致推斷OD值是否準確！菌液看上去渾濁，但OD值不高，很可能OD稀釋倍數不夠！
2） OD值是否測準也可以這樣估算：OD600為40左右時，菌體濕重（6000rpm離心5min）約0.95g/10ml。高密度發酵時菌體濕重將相應下降。
2、75ml的菌，經18h左右的培養，最後sorbital洗滌完畢後，50ml離心管裏所剩菌體特別濃，需要1ml sorbitol才可溶解為糊狀。正常培養的OD在1.2～1.5之間的500ml菌液，收集的感受態也用1ml稀釋的，沒那麽粘稠。可以看看降低培養溫度（27攝氏度）或縮短培養時間（12h）。
3、甚至不用轉接,直接挑單克隆在50－100mlYPD中搖過夜，效果也很好
二、製備感受態的菌液量
如果隻轉一個樣品，50ml就夠了，一般50ml的培養液如果OD值正常的話夠做10管感受態的，其他的按比例縮小。用大試管搖5ml菌液，然後取1ml毫升在1.5mlEP管中製感受態，每一步的離心時間30秒就行。整個流程時間短，製備好的感受態用來做轉化的效率很高。
山梨醇離心，洗滌的過程之後的重懸的時候注意濃度，不要過於粘稠和稀釋。
三、感受態的保存
感受態細胞做好後由於電轉化杯還沒有處理好等原因，在冰上放幾個小時再做可能有一定的影響，盡量馬上製備馬上轉化。如果感受態細胞要保存，不需要加甘油，一般80ul EP管分裝，-70 或 -80 攝氏度保存。
另附：酵母GS115點種分離純化
接種GS115於5ml YPD液體培養基，30℃，200rpm振蕩過夜，塗布 YPD平板，30℃培養48 小時，用 YNB基本培養基和含His的補充培養基作點種分離純化，挑選在補充培養基生上生長而在基本培養基上不生長的單菌落劃YPD平板，4℃保存。
四、電轉化注意點：
1、感受態做好後，最後一次吸出sorbital時，不是直接倒調的，而是用毛細管輕吸出來的，這樣可能使剩下的感受態純淨些。
2、最後用毛細管取出100ul出來，加入質粒，混勻！（怕量不夠，吸得很多，電轉時效果反而不好。）
3、電轉杯清潔處理:一般先衝洗，洗淨；然後浸泡在75%的乙醇中；使用前我們都是放在超淨台上，開啟紫外，邊吹風晾幹，邊進行紫外照射。電轉杯的新包裝或重複使用可能對轉化率有一定的影響。
4、電擊的時候，電壓數以及電擊時間可以摸索一下，適當增加電壓或者延長電擊時間都可以。電擊條件比如1.5kv，放電4.8～5.5ms。電擊所有過程都要盡量在冰上進行，電擊時間可以減少一點，設置為5ms左右，電擊之後馬上加入預冷的山梨醇溶液，轉移至EP管，30度靜止培養1h。如果菌體懸液濃度比較大的時候，在製備感受態的時候要留心一下操作中的問題了。
5、電擊之後，加入1ml的山梨醇，吸入1.5ml的ep管中，置於30度搖床低速培養1h，再塗板。
6、注意的是處理液中的DTT是在使用前加入，其它配好後於4度保存，DTT單獨於-20度保存，可配成100倍的貯備液。
7、轉化後1ml用sorbitol重懸的細胞懸液不能全部塗在一塊板子上，按標準程序製作的感受態一般3塊左右可能比較合適，以幹燥後看見一薄層淡淡的白色為宜。轉化子會在白色的薄層上長出圓韻、飽滿的大菌落的。
五、轉化試劑和培養基的正確準備方法
1、MD板子提前幾天做好，放在冰箱裏，塗板的時候吸收效果會好些。如果是新板子，可能吸收不是太好，板子上有些積層，反而不利於生長。
2、YNB42度水浴一會，然後過濾除菌，YNB是加到培養基裏麵的，去離子水pH偏低，建議直接用蒸餾水就可以（關係不是太大）。
3、山梨醇，以及無菌去離子水均是冰凍，存放在4度冰箱中
4、一般用10ug以上質粒用SalI酶切，然後直接加乙醇沉澱，70％乙醇洗一遍，約20ul ddH2O重溶。轉化效率一般大於100個克隆每ugDNA。有人用LiCl和DTT處理細胞，轉化效率很高，可以試試。建議你不要用膠回收kit，回收的DNA可能還有鹽，導致電擊時放電時間很短。
5個電轉化方案
方法一：高效
1.收集菌體
取1mlGS115過夜培養物(OD約6-10) 分裝到1.5ml EP管中，4℃、10000g 離心1min，棄上清，沉澱用無菌水(4℃)洗滌，同樣條件下離心，棄上清。
2.菌體處理
加入1ml處理液，室溫下放置20min。
處理液：
10mM LiAc
10mM DTT
0.6M sorbitol
10mM TrisHCl(pH7.5)
3.離心，棄上清，加入1ml 1M sorbitol ，離心，棄上清，
4.用1M sorbitol洗滌二次，到最終體積約為80μl.（菌體太多可適當棄去部分）
5.加入10μl.經過BglⅡ酶切處理的工程質粒，混勻後轉入 電擊杯中，冰浴5min.
6.電轉. 1.5kv，25μF，200Ω條件下進行電轉。
7.電擊後立刻加入1mL 1M sorbitol，吸出後於30℃培養2h。
8.取一定量塗平板(YPDS + Zeocin，塗布的量分別為100、200微升，剩餘的經離心處理後全部塗在一個平板上)
有一點要注意的是處理液中的DTT是在使用前加入，其它配好後於4度保存，DTT單獨於-20度保存，可配成100倍的貯備液。
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