土壤微生物分離純化及測數

   

一、實驗目的要求

1 了解土壤微生物的分離純化及測數的基本原理。

2 學習並掌握微生物分離純化技術方法。

3 學習並掌握微生物平板菌落計數的技術方法。

 

二、基本原理

土壤是微生物生活的大本營，其中含有大量不同類型的微生物，可按照一定的方法將各類微生物通過分離進行純培養，並能對特定類群進行數量測定。基本原理是通過稀釋使菌體細胞充分分散，單細胞得以生長發育形成菌落，可使用稀釋法或平板劃線法進一步純化，還可通過平板菌落計數，推算單位重量土壤樣品含有微生物的數量。

三、實驗步驟

（一）土壤樣品采集

在待測田塊上，若田塊麵積小於50平方米則按對角線三點采樣，若田塊麵積大於50平方米按對角線五點采樣。采樣一般定點於耕作層0--20cm，先除去表土1--2cm，以無菌鏟采土足量充分混勻後用無菌塑料袋分裝。

（二）好氣性細菌的分離純化及測數

1.製備土樣稀釋液

  吹吸三次混勻

  無菌操作

 

另留一管不稀釋留作對照（CK）

2.培養基的準備

融化牛肉膏蛋白腖培養基，融化後保溫在48℃。並取6個無菌培養皿，分別在皿底貼好標簽，注明10-5、10-6、CK（每個稀釋度要兩個平行皿，對照要兩個平行皿）。

3.傾注法接種

先按10-6，10-5的順序將不同稀釋度菌懸液接入對應平皿中（每個平皿接入1ml），再向每個平皿傾注約15 ml的牛肉膏蛋白腖培養基（48℃）待冷凝，混合均勻。