細菌內毒素檢測及臨床應用(1)

 

一 細菌內毒素定量檢測法應用與發展

 

近10年，人們對疾病病因、病理的認識不斷深化，發現了許多疾病與內毒素的關係。由於很小劑量的內毒素即能引起極廣泛的生物作用及病理作用，因而加強內毒素的檢測研究便成為臨床、公衛及藥檢等領域的重要課題。

　　細菌內毒素檢查法又稱鱟試驗法，它是1964年由美國學者Levih和Bang發現，並在1968年正式建立的一種定性或定量檢測微量細菌內毒素的分析方法。該法具有靈敏度高、特異性強和操作簡便快捷的特點，不僅在藥學，而且在微生物學及臨床檢驗等領域應用較為廣泛。1973年，美國食品藥品管理局承認鱟製劑是一種生物製劑。1980年，美國藥典首先收載此法，其後英、德、意、日等國相繼收載了這一檢查方法。1983年我國衛生部檢驗地帶網授權中國藥品生物製品檢定所組織全國範圍的大輸液及放射性藥品鱟試驗檢查方法。1995年，中國藥典收載了修訂後的細菌內毒素檢查法，並取消了原熱原檢查。2003年，對細菌內毒素定量檢測開始在我國臨床全麵開展應用。 www.labdd.com

　　鱟試驗法可廣泛用於革蘭氏陰性菌感染的快速診斷，可對患者的血液、尿液及腦脊液進行直接檢查，有助臨床醫生及時發現內毒素疾病，以迅速采取果斷的治療。在公共衛生方麵，鱟試驗法可對水源、食物、飲料等進行內毒素測定，以便將其控製在規定水平以下，預防疾病，保障人民健康。用此法檢測藥品和生物製品等開展較早，如美國收載檢測品種已上升為600多個。而且國外用此法檢測醫療用具中內毒素汙染含量的研究進行的比較深入。

　　據有關資料，正常人血中內毒素濃度為：＜0.1EU/ml，超過此值即可診斷為內毒素血症。

　　許多研究表明，內毒素與多種疾病密切相關，內毒素血症多隨病情惡化而加重，隨病情緩解而減輕。因此內毒素可以作為一個衡量病情和判斷預後的參考指標，也可用於臨床治療及判定療效或篩選恰當藥物的指標之一。

 

二 血液中細菌內毒素微量測定與臨床意義

 

自1968年Levin和Bang發現並建立鱟試驗方法以來，逐漸得到臨床和藥檢部門的重視。尤其是在臨床檢驗方麵的應用更是飛速發展。隨著鱟試驗方法研究和測定儀器的不斷完善，內毒素測定已由最初的定性凝膠法向靈敏度更高的微量定量方麵發展。目前，在日本以合成基質法為中心的血漿內毒素測定變得更快速，準確，更加使用於臨床各種感染症狀的診斷。

 

據國外文獻報道：正常人血漿檢驗地帶網中的內毒素水平一般在0.1EU/ml左右，然而由於前處理方法及測定原理的不同其值也存在著一定差異。隨著血液前處理方法的標準化和國內血液前處理液的生產，我國臨床內毒素的定量動態檢測水平將會提高，內毒素儀器的定量檢測的標準化進程將會加速。

研究表明：內毒素血症多隨病情惡化而加重，隨病情緩解而減輕。因此內毒素可以作為衡量病情和判斷預後的一個參考指標，也可用於指導臨床治療、判斷療效和篩選恰當的藥物。

目前應用鱟試驗陽性對內毒素血症進行診斷，以鱟試驗濁度法或基質顯色法測定，血漿內毒素濃度大於0.1EU/ml為定量標準，並證實它對革蘭氏陰性菌敗血症的判斷優於血培養。應用該法探討不同疾病的內毒素血症發病率，結果為急性肝炎37%～64%，爆發性肝炎為58%～100%，且腹水與無腹水有顯著差異。

膽石症伴或不伴感染均有不同程度的內毒素臨床表現，在急性梗阻性化膿性感染時，內毒素血症發生率最高（85%），而陰性僅占21%，且內毒素病員低血壓與死亡率是革蘭氏陽性菌血症的2倍。

Nachum等應用尿液稀釋凝膠法研究了1286例尿路感染病例發現：鱟試驗區分顯著性和非顯著性菌尿症的能力為93%。國內不斷尿路感染時，尿液內毒素濃度大於0.1EU/m為84%，而非感染者僅為2.3%。

 

早期診斷是多器官功能衰竭預防與救治的關鍵。一些實驗表明，血漿水平的陽性預測值頗高，有些學者提出內毒素水平對多功能衰竭的監測有預警意義，動態觀測其變化有助於早期診斷與預防。除此以外，內毒素與急重症疾病、呼吸係統疾病、消化係統疾病、心血管係統疾病、口腔係統疾病、泌尿係統疾病等有著密切關係，定量動態檢測內毒素有助於疾病的早期診斷和治療。

標本采集注意事項：選擇患者沒有接受靜脈治療的時刻；靜脈全血的量一定不能超過1ml；標本采集完畢後建議2～8℃冷藏保存，時間不宜超過4h；