布氏杆菌實驗診斷技術

 

《WHO實驗室生物安全手冊》將布氏杆菌列為Ⅲ類危險級。布氏杆菌病是最容易實驗室感染的疾病之一，當處理培養物和嚴重感染樣品(如流產的材料)時要采取嚴格的安全預防措施。羊種布氏杆菌對人有高度致病性，是世界上最嚴重的人畜共患病之一。牛種布氏杆菌對人也具有高度致病性，實驗室操作活的培養物或動物的汙染材料是很危險的，必須在嚴格的生物安全三級或更高控製條件下進行，盡量減少職業暴露。處理大量布氏杆菌建議使用不低於生物安全三級的控製條件。職業性接觸常致病，通常口、呼吸係統、結膜是主要感染途徑，食人感染的奶製品構成主要的公共衛生危害。獸醫和農民經常接觸感染動物和流產胎兒或胎盤，存在很大的職業危險。

 

 

    1．樣品收集與培養

    以細菌培養診斷動物布氏杆菌病時，樣品的選擇應以觀察到的臨床症狀為依據。最有用的樣品包括流產的胎兒(胃內容物、脾、肺)、胎膜、陰道分泌物(陰道衝洗物)、奶、精液、關節炎和水囊瘤液。死後采集樣品的首選組織為網狀內皮組織(如頭、乳腺和生殖器淋巴結及脾)、懷孕後期或生產後早期的子宮、乳房。通常2-3天即可見有菌落生長，如無細菌生長也要培養8-10天才能認為是陰性而棄去。所有樣品采集後應冷藏並立即用最快的方式運送到實驗室。送到實驗室時，奶和組織樣品如不馬上分離應冷凍保存。

 

    2．培養特性

    布氏杆菌為需氧菌，對營養要求嚴格，初代分離培養時，須在含肝湯、血清等營養豐富的培養基上才能生長。許多實驗室在基礎培養基(如血瓊脂基礎、哥倫比亞瓊脂)中加入血清以促進某些布氏杆菌菌株的生長，如加入2％～5％的牛血清或馬血清，則是牛種布氏杆菌2型生長所必需的。其他合適的培養基還有血清葡萄糖瓊脂(SDA)、甘油葡萄糖瓊脂。該菌生長緩慢，一般需要7一“天或更長時間才能長出肉眼可見的菌落。比較起來，羊種布氏杆菌生長最慢，豬種布氏杆菌最快，牛種布氏杆菌介於兩者之間。多次傳代後，不但生長變快(2-3天即可長出菌落)，而且對營養要求低，在普通培養基上也能生長。在血清肝湯瓊脂上，形成濕潤、閃光、表麵隆起、邊緣整齊的菌落。直徑1～2mm。透射光下，菌落呈淺黃色有光澤，半透明。從上麵看，菌落微隆起，灰白色。隨時間推移，菌落變大，顏色變暗。光滑型(S)布氏杆菌在培養特別是繼代培樣時易發生變異而形成粗糙型(R)，菌落透明度降低、邊緣粗糙、表麵幹燥、在折射光下呈暗白或黃色。變異檢查操作簡單，如用結晶紫染色，粗糙型菌落染成紅色；而光滑型菌落染成淺黃色。如果菌落是光滑型的，則應用光滑型牛種布氏杆菌抗血清或最好用A和M表麵抗原特異單價抗血清進行試驗。若為非光滑型菌落，分離物應用布氏杆菌R抗原的抗血清進行測試。

 

    3．形態與染色

    該菌初次分離培養時多呈球杆狀，牛布氏杆菌、豬布氏杆菌經傳代培養漸呈杆狀，羊布氏杆菌則不變。布氏杆菌多為長0．6-1．5gm，寬0．5-0．7／zm的球杆菌或短杆菌。它們多單獨存在，很少成對或成團。布氏杆菌無鞭毛不運動、無菌毛、無芽孢、不形成真正的莢膜。布氏杆菌革蘭染色陰性，一般不發生兩極著染。用改良Ziehl-Neelsen方法染色，布氏杆菌菌體染成紅色，背景為藍色。

 

    4．生化特性

    該菌分解糖類的能力因種類而不同。一般能分解葡萄糖產生少量酸，不能分解甘露糖，不能產生靛基質，不液化明膠，不凝固紫乳。VP試驗及MR試驗均陰性。有些菌型能分解尿素和產生H₂S。