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血培養檢測規範化操作(3)



錄入時間:2011-5-31 10:10:44 來源:檢驗地帶網

 
血培養檢測--陽性結果的處理:
傳統手工法血培養應該每天至少檢查一次,對48h~72h未生長的培養瓶至少應進行需氧傳種培養一次。對培養瓶進行肉眼檢查,注意下列幾點提示有微生物生長:
1. 血與肉湯混合物出現渾濁。
2. 在血液層上有絮狀沉澱,某些鏈球菌在沉積的紅細胞表麵上,會有小的“棉球樣”生長。
3. 肉湯內出現渾濁生長。
4. 肉湯表麵有薄膜生長。
5. 出現溶血。
6. 產生氣體,許多發酵菌可產氣,梭菌屬會產生大量的氣體,出現明顯的溶血現象。
7. 血液層表麵或深層有白色顆粒。
8. 液體培養基凝固。
 
如果懷疑血培養陽性,應立即進行革蘭染色,以無菌手續從培養瓶中取肉湯2~3滴塗片,自然幹燥,加熱固定並染色。染色結果應盡快報告,如革蘭陽性球菌為成對或成堆或成鏈,革蘭陰性杆菌為小杆菌或球杆菌等。革蘭染色結果可指導醫生為患者經驗選擇抗生素治療,並作為實驗室進行細菌鑒定補充試驗的參考依據,它對於鑒別葡萄球菌和鏈球菌非常有用。如果血培養陽性革蘭染色未發現細菌,應做吖啶橙染色進行二次鏡檢,這對檢測彎曲菌菌血症和布魯菌菌血症很有幫助,而革蘭染色很少發現這些細菌。依據細菌革蘭染色形態特點,選擇適當的培養基傳種,見表1。
表1。 血培養陽性後根據革蘭染色特點應傳種培養基種類的建議
染色特點 5%~10%CO2孵育   厭氧氣體孵育ª
血瓊脂 巧克力瓊脂 中國蘭或麥康凱或EMB 血瓊脂 PEA或CAN
革蘭陽性
球菌 × × ×
杆菌 × × ×
革蘭陰性
球菌 × × × ×
杆菌 × × × × ×
真菌b × ×
持續檢測陽性 × × ×
革蘭染色陰性c
a所有培養至少至48h;EMB;伊紅美藍瓊脂;PEA;苯乙基醇瓊脂;CAN;多粘菌素-萘啶酮酸瓊脂。
b增加真菌培養基(如:沙保弱葡萄糖瓊脂)和30℃培養。
c接種硫羥乙酸鹽肉湯中。
當革蘭染色顯示細菌形態均一時,厭氧培養的價值不大。對所有培養陽性,革蘭染色陰性的血培養瓶,再次上機檢測之前都應傳種厭氧和需氧培養皿。
革蘭染色為純的細菌,可進行初步鑒定並做直接抗生素藥敏試驗的標準程序,而且沒有經FDA批準的市售產品。可用於初步鑒定的商品試劑,包括:膽汁溶解,DNA酶,乳膠凝集分型實驗等。
美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)推薦的抗生素敏感試驗沒有血培養直接敏感試驗法。然而,許多學者提出:根據革蘭染色初步分析鑒定,可以靈活地選擇抗生素進行直接抗生素藥敏試驗。
對各種血培養法中的陽性肉湯培養物進行傳種並且立即孵育培養,為進一步試驗用,傳種5h-7h後有明顯的菌落生長,取瓊脂表麵的菌落用於細菌鑒定和抗生素敏感試驗。使用含固體培養基的血培養係統,如:雙相法,有菌落生長可直接進行細菌鑒定和標準的抗生素敏感試驗。
盡管現在使用探針雜交和DNA擴增技術可以鑒定血培養中的細菌和檢測抗生素敏感性,但這種技術不實用,價格昂貴,FDA不推薦常規使用。
血培養分離的細菌,萬一需要進一步的研究,至少保存幾個星期。為了讓細菌活著,兼性需氧菌和兼性厭氧菌應傳種到半固體培養基中,例如動力培養基。嚴格厭氧菌應保存到無葡萄糖的肉湯培養基或冷凍在兔血或脫脂牛奶培養基中。柯養菌可以接種到巧克力瓊脂斜麵上並用礦物油封存。為長期儲存,細菌可懸浮於15%甘油肉湯中並-70℃冷凍。
 
血培養陽性結果的報告程序:
血培養陽性結果十分重要,應立即口頭報告給患者的主治醫生,報告的日期和時間以及接受報告人的姓名應記錄在患者的報告單上。應向臨床醫師提供重要的信息,包括革蘭染色的形態,血培養陽性的數量和其他的鑒定資料,如革蘭陽性球菌可疑為葡萄球菌。處理報告之前,應回顧一下患者近期標本的培養情況,這些結果有助於解釋感染微生物來源。口頭報告後應立即進行書麵初步報告。除非初步報告有錯誤或新發現可改變患者的治療方案,否則不應更改初步報告的結果。
當培養24h和48h後,對陰性血培養結果在最短的時間內發出初步報告。有些實驗室以培養的時間長短發初步報告,例如:“血培養3天後無細菌生長”。
 
 
 
血培養檢測 真菌培養:
多種方法可提高血液中真菌的檢出率,包括使用通氣的真空血培養瓶、雙相培養基、裂解-離心技術和特殊營養的肉湯培養基(如腦心侵液肉湯等)。裂解-離心技術是一種分離真菌的有效方法,特別是對於營養要求可可的雙相真菌。實際上,大多數需氧的血培養瓶(通常孵育5至7天)可提供充足的營養支持白色念珠菌的生長。然而對於其他念珠菌屬、光滑球擬酵母菌、新型隱球菌、莢膜組織胞漿菌和其他雙相真菌,使用裂解-離心技術可獲得最高的檢出率。黴菌抑製瓊脂、腦心侵液瓊脂和巧克力瓊脂通常與lsolator管結合使用。對於分離糠秕鱗斑黴,可在培養基表麵覆蓋一層橄欖油或其他長鏈脂肪酸。陰性的真菌血培養應於22-30℃孵育4周後再仍棄.

 

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