金黃色葡萄球菌的實驗室鑒定

1.  標本采集采自不同感染部位的各種標本，包括血液、腦脊液、穿刺液；痰液、膿液、創傷分泌物、尿液、糞便和嘔吐物等。

2.  直接塗片鏡檢直接塗片檢查在正常情況下呈無菌狀態的體液標本如血液、腦脊液、穿刺液等，若有檢出革蘭氏陽性，顯微鏡下呈葡萄狀排列、無芽胞、莢膜，直徑0.5-1μm的球菌。即具有重要的臨床價值。

3.  分離培養可以選用普通營養瓊脂平板、血平板和高鹽甘露醇平板，血平板用葡萄糖肉湯增菌培養基。該菌在普通肉湯中呈均勻迅速混濁生長；若接種於瓊脂平板上35℃過夜後可形成直徑約2~3mm的厚菌落、濕潤有光澤、呈金黃色不透明圓形凸起。若接種於血平板，菌落周圍可形成明顯的透明的β—溶血環。在高甘露醇平板上金黃色葡萄球菌生成淡橙黃色菌落，以此可與其他凝固酶陰性的葡萄球菌相鑒別。

 

4.   鑒別實驗

（1）血漿凝固酶試驗：血漿凝固酶是金黃色葡萄球菌所產生的，與其致病力有關的一種侵襲性酶，其作用是使血漿中的纖維蛋白在菌體表麵沉積和凝固以阻礙吞噬細胞的吞噬。血漿凝固酶分為結合型和遊離型。前者結合在細菌的細胞壁上，能直接作用於血漿中的纖維蛋白原，使之轉化為纖維蛋白，環繞菌體而形成凝塊。而遊離型血漿凝固酶則在產生後被分泌到菌體外，不能直接作用於纖維蛋白原，但可以激活血漿凝血酶原，使之轉化成凝血酶，後者再作用於纖維蛋白原使其轉化為纖維蛋白。具體的測量方法也因此分為玻片法和試管法兩種。

   玻片法將待試菌落乳化於玻片上的鹽水中，經10~20S證實無自凝後，用接種環取人或兔血漿一環，與乳化菌液混合，出現凝集者為陽性，另設生理鹽水為陰性對照。

   試管法吸取0.5mL兔血漿與0.5mL金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯24小時培養物充分混勻，置37℃培養，每隔半小時觀察一次，連續觀察6小時，出現凝固，即將小試管傾斜或倒置時，內容物不流動，判為陽性。

 

（2）耐熱核酸酶試驗：將24小時肉湯培養物沸水浴處理15min，用接種環劃線刺種於甲苯胺蘭-DNA平板，35℃培養24小時，在刺種線周圍出現淡粉色者為陽性。本試驗金黃色葡萄球菌為陽性。

 

（3）甘露醇發酵實驗金黃色葡萄球菌可發酵甘露醇。

 

（4）Staphaurex 膠乳凝集實驗是鑒定金黃色葡萄球菌的一種快速、簡便的商品化直接凝集試驗。其基本原理是在紙片上滴加包被有纖維蛋白原和IgG抗體的聚苯乙烯膠乳，然後用接種環挑取待鑒定菌株的新鮮培養物加入混勻，若出現凝集塊現象即為陽性。

 

 

5.      生化鑒定如上述，注意與其他凝固酶陽性的葡萄球菌的鑒別要點：PYR（吡咯烷酮-β-萘基酰胺試驗陰性；VP試驗陽性；鳥氨酸脫羧酶試驗陰性。

 

6.      免疫學方法用酶聯免疫吸附試驗和對流免疫電泳方法可檢測金葡菌的磷壁酸抗體。

 

7.      分子生物學方法包括PFGE脈衝場凝膠電泳以及酶切圖譜分析等。