顯微鏡是觀察細菌形態的必備儀器。分為光學顯微鏡和電子顯微鏡。光學顯微鏡有普通光學顯微鏡、暗視野顯微鏡、相差顯微鏡、熒光顯微鏡等。
1.不染色可以觀察細菌的動力及運動等活體狀況,由於細菌的折光性不強,不能清楚的看到細菌的形態特征和結構。
標本的製作懸滴法、壓滴法和毛細管法,後者主要用於厭氧菌的動力觀察。用普通光學顯微鏡、暗視野顯微鏡或位相差顯微鏡觀察。
2.染色標本的形態檢查
細菌的染色可能是由於毛細管現象和染料的滲透作用、染料的溶解和吸收作用使染料進入細胞內,或由於電荷的吸附和結合使細菌著色。也可能與細菌細胞內的化學成分有關。此外細菌的染色性與細菌細胞膜的通透性、細胞結構的完整性,以及培養基的種類、菌齡,染色液的離子強度、pH,染色溫度等密切相關。
醫學檢驗中常用的染料:
酸性染料 細菌一般情況下都帶負電荷,故酸性染料一般不著色。如剛果紅、伊紅等。
堿性染料 細菌一般情況下都帶負電荷,因此能與細菌結合,細菌學檢查中常用此類染料。如美藍、結晶紫和堿性複紅等。
複合染料 如姬姆薩染料,是堿性和酸性染料的複合物。
單純染料 如蘇丹類染料,溶於脂肪溶劑中,不溶於水,化學親和力低。
3.染色方法
應先製作細菌塗片。方法有單染色法和複合染色法。
(1)革蘭染色法 染液由革蘭結晶紫染液、革蘭碘液、95%酒精和稀釋石炭酸複紅(沙黃)組成。革蘭陽性菌為紫色,革蘭陰性菌呈紅色。
影響因素:塗片過厚將使脫色不完全,酒精脫色時間過長將導致過度脫色;染液儲存過久由於蒸發而影響濃度,特別是碘液久存或見光而形成碘酸,失去媒染作用;95%酒精如果密封不佳易揮發,失去脫色作用;細菌形態學檢查以對數生長期的細菌形態最為典型,菌齡過長易致陰性。
(2)抗酸染色法 染液由石炭酸複紅、3%鹽酸酒精和美藍組成。抗酸菌呈紅色,非抗酸菌和細胞呈藍色。
本法主要用於結核分枝杆菌和麻風分枝杆菌的檢查,每張載玻片上隻能塗1份標本,最好使用新玻片,否則必須徹底清洗幹淨。染色使不得使用染色缸,吸水紙1片1張不得重複使用。脫色時間不得過短。為了防止實驗室感染可將標本先進行高壓蒸氣滅菌,然後進行抗酸染色。
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