食品微生物實驗室工作人員,必須有嚴格的無菌觀念,許多試驗要求在無菌條件下進行,主要原因:一是防止試驗操作中人為汙染樣品,二是保證工作人員安全,防止檢出的致病菌由於操作不當造成個人汙染。
一、無菌操作要求
1. 接種細菌時必須穿工作服、戴工作帽。
2. 進行接種食品樣品時,必須穿專用的工作服、帽及拖鞋,應放在無菌室緩衝間,工作前經紫外線消毒後使用。
3. 接種食品樣品時,應在進無菌室前用肥皂洗手,然後用75%酒精棉球將手擦幹淨。
4. 進行接種所用的吸管,平皿及培養基等必須經消毒滅菌,打開包裝未使用完的器皿,不能放置後再使用,金屬用具應高壓滅菌或用95%酒精點燃燒灼三次後使用。
5. 從包裝中取出吸管時,吸管尖部不能觸及外露部位,使用吸管接種於試管或平皿時,吸管尖不得觸及試管或平皿邊。
6. 接種樣品、轉種細菌必須在酒精燈前操作,接種細菌或樣品時,吸管從包裝中取出後及打開試管塞都要通過火焰消毒。
7. 接種環和針在接種細菌前應經火焰燒灼全部金屬絲,必要時還要燒到環和針與杆的連接處,接種結核菌和烈性菌的接種環應在沸水中煮沸5min,再經火焰燒灼。
8. 吸管吸取菌液或樣品時,應用相應的橡皮頭吸取,不得直接用口吸。
二、無菌間使用要求
1. 無菌間通向外麵的窗戶應為雙層玻璃,並要密封,不得隨意打開,並設有與無菌間大小相應的緩衝間及推拉門,另設有0.5-0.7m2的小窗,以備進入無菌間後傳遞物品。
2. 無菌間內應保持清潔,工作後用2%-3%煤酚皂溶液消毒,擦拭工作台麵,不得存放與實驗無關的物品。
3. 無菌間使用前後應將門關緊,打開紫外燈,如采用室內懸吊紫外燈消毒時,需30W紫外燈,距離在1.0m處,照射時間不少於30min,使用紫外燈,應注意不得直接在紫外線下操作,以免引起損傷,燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕擦拭,除去上麵灰塵和油垢,以減少紫外線穿透的影響。
4. 處理和接種食品標本時,進入無菌間操作,不得隨意出入,如需要傳遞物品,可通過小窗傳遞。
5. 在無菌間內如需要安裝空調時,則應有過濾裝置
三、消毒滅菌要求
微生物檢測用的玻璃器皿、金屬用具及培養基、被汙染和接種的培養物等,必須經滅菌後方能使用。
(一)幹熱和濕熱高壓蒸氣鍋滅菌方法
1.滅菌前準備
(1)所有需要滅菌的物品首先應清洗晾幹,玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴密,如用金屬筒應將上麵通氣孔打開。
(2)裝培養基的三角瓶塞,用紙包好,試管蓋好蓋,注射器須將管芯抽出,用紗布包好。
2.裝放
(1)幹熱滅菌器:裝放物品不可過擠,且不能接觸箱的四壁。
(2)大型高壓蒸氣鍋:放置滅菌物品分別包紮好,直接放入消毒筒內,物品之間不能過擠。
3.設備檢查
(1)檢查門的開關是否靈活,橡皮圈有無損壞,是否平整。
(2)檢查壓力表蒸氣排盡時是否停留在零位,關好門和蓋,通蒸氣或加熱後,觀察是否漏氣,壓力表與溫度計所標示的狀況是否吻合,管道有無堵塞。
(3)對有自動電子程序控製裝置的滅菌器,使用前應檢查規定的程序,是否符合於進行滅菌處理的要求。
4.滅菌處理
(1) 幹熱滅菌法:此法適應於在幹熱情況下,不損壞、不變質、不蒸發的物品、較常用於玻璃器皿、金屬製品、陶瓷製品等的滅菌。
① 器械器皿應清洗後再幹烤,以防附著在表麵的汙物炭化。
② 滅菌時安放物品不能過擠,不要直接接觸底和箱壁,物品之間留有空隙。
③ 菌時將箱門關緊,接上電源,先將排氣孔打開約30min,排除滅菌器中的冷空氣,溫度升至160℃調節指示燈,維持1.5 –2h。
④ 滅菌完畢後或溫度升溫過程中,須在60℃以下才能打開箱門。
(2) 手提式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應按下列步驟進行:
① 手提式高壓鍋在主體內加入3L清水,立式高壓鍋加水16L(重複使用時應將水量補足,水變混濁需更換).
② 手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內壁的方管中(無軟管或軟管鏽蝕破裂的滅菌器不得使用)。
③ 蓋好頂蓋擰緊,勿使漏氣;置滅菌器於火源上加熱,立式壓力鍋通上電源,並打開頂蓋上的排氣閥放了冷氣(水沸騰後排氣10-15min)。
④ 關閉排氣閥,使蒸氣壓上升到規定要求,並維持規定時間(按滅菌物品性質與有關情況而定)。
⑤ 達到規定時間後,對需幹燥的物品,立即打開排氣閥排出蒸氣,待壓力恢複到零時,自然冷卻至60℃後開蓋取物,如為液體物品,不要打開排氣閥,而應立即將鍋去除熱源,待自然冷卻,壓力恢複至零,溫度降到60℃以下 再開蓋取物,以防突然減壓液體劇烈沸騰或容器爆破。
(3) 臥式壓力鍋蒸氣滅菌器的使用按下列步驟進行:
① 關緊鍋門,打開進氣閥,將蒸氣引入夾層進行預熱,夾層內冷空氣經阻氣器自動排出。
② 夾層達到預定溫度後,打開鍋室進氣閥,將蒸氣引入鍋室,鍋室內冷空氣經鍋室阻氣器自動排出。
③ 待鍋室達到規定的壓力與溫度時,調節進氣閥,使保持恒定至
④ 自然或人工降溫至60℃再開門取物,不得使用快速排出蒸氣法,以防突然降壓,液體劇烈沸騰或容器爆破。
⑤ 使用自動程序控製式壓力蒸氣滅菌器,在放好物品關緊門後,應根據物品類別按動相應開關,以便按要求程序自動進行滅菌,滅菌時必須利用附設儀表記錄溫度與時間以備查,操作要求應嚴格按照廠家說明書進行。
5.滅菌溫度與時間(1) 幹熱滅菌器滅菌溫度160℃,1.5-2h。(2) 壓力蒸氣滅菌鍋滅菌溫度與時間
(二)間歇滅菌方法
1.滅菌方法係利用不加壓力的蒸氣滅菌,某些物質經高壓蒸氣滅菌容易破壞,可用此法滅菌。
(1)將欲滅菌物品置於鍋內,蓋上頂蓋,打開排水口,使器內餘水排盡。
(2)關閉排水口,打開進氣門,根據需要消毒10~20min。
(3)滅菌完畢關閉進氣門,取出物品待冷至室溫溫度,放入37℃溫箱過夜,次日仍按上述方法消毒,如此三次,即可達到滅菌目的。
2.血清凝固器使用方法,培養基中含有血清或雞蛋特殊成份時,因高熱會破壞其營養成份,故用低溫,可使血清凝固,又可達到滅菌目的。
(1) 在使用該法滅菌的血清等分裝時,需嚴格遵守無菌操作,試管、平皿也經滅菌後使用。
(2)將培養基按要求使成斜麵或高層,加足水後,接上電源,升溫75~90℃1h滅菌,放37℃溫箱過夜,再如此滅菌三次。
3.煮沸消毒:可用煮鍋或煮沸消毒器,水沸騰後再煮5~15 min,也可在水中加入2﹪石炭酸煮沸5 min,加入0.02﹪甲醛, 80℃煮60 min均可達到滅菌目的, 但選用煮沸消毒的增消劑時, 應注意對物品的腐蝕性.
4.滅菌處理:滅菌後物品,按正常情況已屬無菌,從滅菌器中取出應仔細檢查放置,以免再度汙染。
(1) 物品取出,隨即檢查包裝的完整性,若有破壞或棉塞脫掉,不可作為無菌物品使用。
(2) 取出的物品,如為包裝有明顯的水浸者,不可作為無菌物品使用。
(3) 培養基或試劑等,應檢查是否符合達到滅菌後的色澤或狀態,未達到者應廢棄。
(4) 啟閉式容器,在取出時應將篩孔關閉。
(5) 取出的物品掉落在地或誤放不潔這處,或沾有水液,均視為受到汙染,不可作為無菌物品使用。
(6) 取出的合格滅菌物品,應存放於貯藏室或防塵櫃內,嚴禁與未滅菌物品混放。
(7) 凡屬合格物品,應標有滅菌日期及有效期限。
(8) 每批滅菌處理完成後,記錄滅菌品名、數量、溫度、時間、操作者。
上一篇:藥典微生物檢測不同類型樣品處理方法
下一篇:食品衛生微生物檢驗實驗室操作要求(下)