傷寒、副傷寒沙門氏菌檢驗的標準操作程序

錄入時間:2011-5-11 10:14:07 來源：互聯網

【目的】

指導檢驗傷寒、副傷寒沙門氏菌。

【該SOP變動程序】

本標準操作程序的改動，可由任一使用本SOP的工作人員提出，並報經下述人員批準簽字：專業主管、科主任。

【標本的采集】

由受檢者將采便用已蘸有甘油鹽水的棉棒自行插入肛門內，輕輕轉動，然後取出，插入帶有編號的塑料試管中，交給檢驗科人員。

【檢驗程序】

采便→分離培養→挑選菌落接種三糖鐵斜麵→生化試驗→血清學試驗→結果報告。

【操作步驟】

1. 分離培養

用棉棒直接劃線接種SS平板，36±1℃培養18-24小時，觀察菌落特征。傷寒及副傷寒沙門氏菌在SS平板上均呈無色半透明、光滑的中等菌落，菌落中心有黑心，但甲型副傷寒及部分傷寒沙門氏菌菌落無黑心。

平板上若有可疑菌落，挑選出來分別接種三糖鐵斜麵。將接種可疑菌的三糖鐵斜麵經36±1℃培養18-24小時後，觀察反應情況。

2. 生化學試驗

凡是三糖鐵反應符合傷寒、副傷寒沙門氏菌特征者，作靛基質試驗，尿素酶試驗，KCN試驗和賴氨酸脫酸酶試驗。符合者做血清學試驗。

傷寒、副傷寒沙門氏菌三糖鐵反應結果

傷寒、副傷寒沙門氏菌生化反應結果

3. 血清學試驗

① 抗原準備

取三糖鐵斜麵培養物作為玻片凝集試驗用的抗原。

② O抗原的鑒定

按下列順序進行：

A-F————→0-2————→0-4————→0-7————→0-9

多價血清血清血清血清血清

∣ ↓ ↓ ↓ ↓

-∣ A群 B群 C群 G群

↓ -

Vi————→菌懸液———————→0—9——→0—7血清

血清 100℃水浴20分鍾血清 +∣

+↓ ↓

可能為傷寒菌可能為丙型副傷寒

③ H抗原的鑒定

根據O抗原出現的凝集情況，選用相應的H因子血清、檢查第1相與第2相H抗原，如果第2相抗原不凝集，可用位相變異試驗檢查。

位相變異試驗方法可采用簡易平板法：將0.5-0.7％半固體瓊脂平板烘幹表麵水份，取因子血清1環，滴在平板表麵，待血清吸收到瓊脂內，便在血清部位的中央點種待檢菌株，培養後，在形成蔓延生長的菌苔邊緣取菌檢查。

傷寒、副傷寒沙門氏菌抗原構造

注：［］有的菌株有此抗原

4. 菌型的判定和結果報告

綜合以上生化學試驗和血清學分型鑒定的結果，判定菌型，報告結果。

【質量控製要求】

1 增菌及分離必須保證一個一支增菌管，一塊平板，禁止多人一管，多人一塊平板。

2.. 分離平板時平板一半以上應有孤立菌落，以供挑選。