細胞培養基的基本常識（下）

抗生素

在細胞培養中最常用的抗生素是青黴素（常用濃度是25~100ui/ml）與鏈黴素（25~100μg/ml）。這兩種抗生素常混合使用。在一些實驗室裏，它們常規加入所有的培養基中。慶大黴素（10~100μg/ml）通常有廣譜抗菌效應，並具有溶液穩定性，故也被一些實驗室使用，特別是當有低水平的汙染存在時更是這樣。以上這些試劑對黴菌與酵母菌的汙染均無效。

盡管很多實驗室在細胞係的培養基中常規加入抗生素作繼代培養，但仍建議不要在原代培養中加入抗生素，其理由之一是獲得的細胞是無菌的，原代培養時的細菌汙染很少發生。其次，盡管認為抗生素對細胞代謝的影響可忽略，但最好避免使用它們，以免細胞生長環境的不穩定。最重要的是要意識到培養中主要汙染物的類型，它們通常暗示了問題的來源。

 

抗有絲分裂劑

某些DNA合成抑製劑對分裂細胞有毒，但對沒有DNA合成的細胞僅有輕微影響。由於神經元通常缺乏DNA合成能力，因此對抗有絲分裂劑沒有多大反應。這樣的試劑常常用於神經元的培養，以消除或減少非神經元群體。若要殺死所有的非神經元細胞，可以先加入血清或生長因子來保證有高比例的非神經元細胞進行DNA合成，此時再加入抗有絲分裂劑。但是，某些細胞在它的細胞周期的某些時相時對抗有絲分裂劑是不敏感的。不過，可以重複的將抗有絲分裂劑使用於增殖的細胞群體。在CNS神經元的培養中抗有絲分裂劑常常在星形細胞形成單層後加入，此時，星形細胞由於接觸抑製而終止了DNA的合成（即細胞停止增殖），它們不會因抗有絲分裂劑的加入而死亡。原代培養中用這種方法阻止成纖維細胞的過度增殖是十分必要的。有兩種抗有絲分裂劑常用於神經元的培養：Fluorodexyuridine，是胸苷合成酶抑製劑，一般使用濃度為～10μM。尿苷（10μM）也常使用，可阻止不分裂細胞的RNA合成。另外，阿糖胞苷也常被使用，其使用濃度為5～50μM。使用任何一種抗有絲分裂劑，都必須考慮它的神經原毒性，應該確定最低效應的使用濃度。阿糖胞苷在很低的濃度下，也會對某些種類的神經元有毒性，可以造成特定神經原的死亡。其他的抗有絲分裂劑尚未表現出這種毒性。

 

培養的保持

培養物是應該保持在孵箱中的。孵箱可以自動將O2與CO2混合很快達到培養基的設計要求，空氣中的氧濃度比血液和腦脊液中要高得多。對於某些細胞的生長，包括神經原，應使氧含量處在一個較低的水平。可以用孵箱達到這個標準，但這樣的孵箱並未廣泛使用。

高濕度可避免培養皿中培養基的蒸發，保持孵箱中的濕度通常是在箱底部放上一大盆水，這水應該經常換，乘水容器應經常消毒以防黴菌生長。若孵箱曾被黴菌孢子嚴重汙染過，那麽要想完全去除汙染則會非常困難。當培養物必須要長期保持在孵箱中時，應采用較少培養基的瓶、皿，且將蓋子蓋緊以避免蒸發，或采用相應的按比例供空氣的孵箱。

 

溫度的精確調節應定期檢查，孵箱溫度常設置為37℃或較低溫度。細胞在低溫時可有較長時間的忍耐限度，但當溫度升至39℃時，幾小時內即死亡。

 

維持培養物的最佳方案常常改變。例如培養膠質細胞時，要經常換液以使其增殖達到最大。而在培養某些神經原時，則要求盡可能少的換液，神經原在兩次換液之間的條件下長的最好。大腦皮質的培養要求在不換液的情形下維持一個月以上。另一方麵，象海馬神經原那樣的細胞，倚賴於條件培養基，若換液太頻繁細胞就會衰退，此時，可采用1/3或1/2換液的方式。