假單孢菌屬檢驗

假單孢菌屬檢驗
 Pseudomonos

一、假單胞菌屬(Pseudomonos)

假單胞菌屬(Pseudomonos)為革蘭氏染色陰性的直或微彎曲杆菌，大多有鞭毛(鼻疽杆菌無鞭毛)，無芽孢和莢膜，非抗酸性，嚴格需氧。個別種能利用反硝化作用進行厭氧呼吸。DNA的G+C含量在50～70mol%。該屬細菌約有140多種，其中已發現對人和動物有重要意義的20多種。鼻疽杆菌、類鼻疽杆菌等為致病菌。該屬細菌中對人和動物有重要意義的20多種。鼻疽杆菌、類鼻疽杆菌等為致病菌。食品中汙染的假單胞菌最常見的有銅綠假單胞菌、熒光假單胞菌、腐敗假單胞菌及嗜麥芽假單胞菌等。椰毒假單胞菌可引起人的食物中毒。假單胞菌屬廣泛分布在土壤、淡水和海水環境中，汙染肉類、魚類及其它食品，在適當條件下大量繁殖，造成這些食品腐敗變質，引起食物型的腸道症狀。

二、銅綠假單胞菌(Ps. aureginosa)

(一)生物學特性

－形態染色特性

銅綠假單胞菌又稱為綠膿杆菌，是土壤中最普遍存在的細菌之一。本菌為革蘭氏陰性杆菌，大小為1.5～3.0×0.5um，在菌體一端有一根鞭毛，能運動，不形成芽孢和莢膜。有菌毛，可傳遞質粒耐藥因子(R因子)。菌體長短不一，有的為球杆狀，有的呈長絲狀。單個、成對排列，或形成短鏈。

－培養特性

專性需氧。生長溫度範圍20～42℃，最適溫度35℃。致病性菌株在42℃生長，但不在4℃生長，籍此可與熒光假單胞菌鑒別。對營養無特殊要求，在普通培養基上生長良好，在選擇培養基如麥康凱瓊脂、SS瓊脂上也能生長。普通瓊脂：形成圓形、邊緣不整齊、扁平稍隆起、光滑濕潤且常呈融合狀態的菌落，能產生水融性色素而使瓊脂被染成藍綠或黃綠色。血平板：菌落大而扁平，濕潤，有金屬光澤，有特殊氣味，顏色灰綠或藍綠，菌落周圍形成透明溶血環。普通肉湯：可在液麵形成菌膜，肉湯稍混濁或透明，上部為藍綠色，振蕩後菌膜易乳化，色素均勻分布。綠膿杆菌可產生多種色素，主要是綠膿素(為綠膿杆菌所特有)。此為無熒光的吩嗪類色素，藍綠色，水溶性，並能溶於氯仿。此外，還可產生青膿素(即熒光色素)、紅膿素(水溶性的紅色色素)、黑膿素(棕黑色水溶性色素)等。但個別菌株不產生色素。

－生化特性

能氧化分解葡萄糖、木糖，產酸不產氣；氧化酶陽性；能液化明膠；分解尿素；能利用枸櫞酸鹽；不產生吲哚；能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，或產生氮氣。

－抗原特性

本細菌有O抗原、H抗原和被膜抗原。其中O抗原有兩種成分，即綠膿杆菌內毒素和原內毒素蛋白質(OEP)，前者成分中脂多糖(LPS)是型特異性抗原，為綠膿杆菌重要的致病因子；OEP是保護性抗原，廣泛存在於假單胞菌屬其它細菌和多種革蘭氏陰性菌中。被膜抗原存在於菌體表麵，具有免疫原性，可刺激機體產生特異性抗體。

－致病性

綠膿杆菌為條件致病菌，當機體抵抗力下降時，可引起各種繼發感染或混合感染，是醫院感染的主要病原菌之一，近年來對動物感染的報道逐年增加。綠膿杆菌常為天然廣譜耐藥菌株。

Pseudomonas aeruginosa is an opportunistic pathogen. The bacteria takes advantage of an individual's weakened    immune system to create an infection and this organism also produces tissue-damaging toxins.

Pseudomonas aeruginosa causes urinary tract infections, respiratory system infections, dermatitis, soft tissue infections, bacteremia, bone and joint infections, gastrointestinal infections and a variety of systemic infections, particularly in patients with severe burns and in cancer and AIDS patients who are immunosuppressed.

(二)分離與鑒定

1 常規檢驗法 根據綠膿杆菌對營養要求不高、在普通瓊脂和血平板上的菌落特性及產生綠膿素等特點，不難進行鑒定。但對不產生色素者，尚需進行生化和血清學試驗予以檢查。

2 血清學反應 除常規檢查法外，鑒定綠膿杆菌還采用間接血凝試驗(IHA)、協同凝集試驗及ELISA等方法。

(1)間接血凝試驗(IHA)：是用經鞣酸處理的綿羊紅細胞吸附OEP作為致敏抗原，測定血清中抗OEP抗體效價。該方法非常敏感，血清稀釋到上萬倍仍可檢出抗體。

(2)協同凝集試驗：此法用於檢測細菌本身並分型。用SPA—綠膿杆菌分型血清，與待檢菌的3～6h培養物作玻片凝集試驗。與普通玻片凝集試驗相比，本方法不僅可縮短時間(15～18h)，還可提高分型率。

(3)ELISA：此法用於檢測綠膿杆菌濾液LPS，且不受其它革蘭氏陰性菌LPS的影響，特異性強。

三、汙染食品的其它常見假單胞菌

(一)熒光假單胞菌(Ps. fluorecens)

熒光假單胞菌為革蘭氏陰性單個或成對排列的杆菌，形態類似綠膿杆菌。單端叢毛，運動活潑。本菌專性需氧，溫域4～30℃，最適溫度25～30℃，在37℃或42℃不生長，但常可耐受37℃。因此，除低溫培養外，通常熒光假單胞菌的檢出率較低。營養要求不高，在普通瓊脂上生長，也可在麥康凱瓊脂和SS瓊脂上生長。菌落呈淺黃綠色，在紫外線照射下呈現熒光。少數菌株無熒光，隻有黃色或綠色色素，但不是綠膿素。產生熒光素的菌株約有94%，該色素水溶性，但不溶於氯仿。氧化酶陽性；能氧化分解葡萄糖、木糖，產酸不產氣；能液化明膠；水解精氨酸；能利用醋酸鹽為唯一碳源。

圖： A scanning electron micrograph of the aerobic soil bacterium Pseudomonas fluorescens. The bacterium uses its long, whiplike flagellae to propel itself through the water layer that surrounds soil particles.

(二)腐敗假單胞菌

腐敗假單胞菌是腐物寄生菌。一端單鞭毛，有的有側鞭毛，運動活潑。無芽孢，無莢膜。本菌需氧，對營養無特殊要求，銨離子可作為唯一氮源，醋酸鹽可作為唯一碳源和能源。在22～30℃生長良好，4℃可生長，42℃生長不定。在瓊脂培養基上可形成淡紅褐色或粉紅色、略帶黏液樣菌落。在卵黃瓊脂、DNA酶瓊脂和假單胞菌瓊脂P培養基上，可產生淡紅褐色熒光色素。在假單胞菌瓊脂F上則產生黃色水溶性熒光色素。由於本菌能產生硫化氫，能使三糖鐵瓊脂底部變黑，易與沙門氏菌、變形杆菌相混淆。氧化酶陽性；DNA酶陽性；鳥氨酸脫羧酶陽性；能分解葡萄糖，但有些菌株遲緩分解或不分解。

本菌在自然界分布廣泛，存在於土壤和水體中。可自牛乳、乳酪、蛋品、河水、汙水、組織培養液、油乳劑、天然氣、石油產品中分離到。能使乳酪、蛋品、魚類腐敗並產生硫化氫。

(三)嗜麥芽假單胞菌(Ps. maltophilia)