黃曲黴菌及其毒素的檢驗

黃曲黴毒素存在於黴變的花生、穀物、果仁和大米上。肝癌與黃曲黴毒素含量高有直接關係。為了防止產生黃曲黴毒素，最好將桃仁、果仁、穀物貯藏在密封和幹燥的地方，不要吃發黴的食品，尤其是發黴的幹果、桃仁和糧食。

 

(一)產毒菌及其特性

1． 黃曲黴菌  本菌屬真菌門、半知菌亞門叢梗孢科曲黴屬。本菌為需氧菌，最適溫度30～33℃，相對濕度80－90％為最佳條件。花生、玉米、大米和小麥是其較好的生長基質。

2． 寄生曲黴  寄生曲黴也是產生AFT的主要菌株，其特性與黃曲黴類似。我國分布較少。

3． 其他   青黴、毛黴和根黴等真菌也能產生AFT，但產毒量甚微，其特性與黃曲黴類似。

 

(二)黃曲黴毒素的種類及對食品的汙染

黃曲黴毒素(AFT)是一類化學結構類似的化合物，均為二氫呋喃香豆素的衍生物。在紫外線照射下能產生熒光，根據熒光顏色不同，將其分為B族和G族兩大類及其衍生物。AFT目前已發現20餘種。AFT主要汙染糧油食品、動植物食品等；其中以花生和玉米汙染最嚴重。家庭自製發酵食品也能檢出黃曲黴毒素，尤其是高溫高濕地區的糧油及製品種撿出率更高。

 

(三)黃曲黴毒素的特性

1、AFT的毒性極強    遠遠高於氰化物、砷化物和有機農藥的毒性，其中以B1毒性最大。當人攝入量大時，可發生急性中毒，出現急性肝炎、出血性壞死、肝細胞脂肪變性和膽管增生。當微量持續攝人，可造成慢性中毒，生長障礙，引起纖維性病變，致使纖維組織增生。AFT的致癌力也居首位，是目前已知最強致癌物之一。

2、AFT具耐熱性   一般烹調加工溫度不能將其破壞，裂解溫度為280℃。在水中溶解度較低，溶於油及一些有機溶劑，如氯仿和甲醇中，但不溶於乙醚、石油醚及乙烷。

3、食品中所汙染的主要是黃曲黴毒素B1，其毒性目前一般認為有三種臨床特征：

(1)急性中毒：它是一種劇毒物質，毒性比KCN大100倍，僅次肉毒黴素，是目前已知黴菌毒素中毒性最強的。

(2)慢性中毒：長期攝入小劑量的黃曲黴毒素則造成慢性中毒。其主要變化特征為肝髒出現慢性損傷，如肝實質細胞變性、肝硬化等。出現動物生長發育遲緩，體重減輕，母畜不孕或產仔少等係列症狀

(3)致癌性：AFT是目前所知致癌性最強的化學物質。A 致癌範圍廣，能誘發多種動物的實驗腫瘤；B 致癌強度大，其致癌能力比六六六大1萬倍；C 可誘發多種癌，AFT主要誘發肝癌，還可胃癌、腎癌、淚腺癌、直腸癌、乳腺癌，卵巢及小腸等部位的腫瘤，還可出現畸胎。

 

(四)檢驗

1. 黃曲黴菌菌落及形態觀察

黃曲黴菌菌落生長較快，10～14天,直徑3～4或6～7cm。菌落正麵色澤也隨其生長由白色變為黃色及黃綠色，呈半絨毛狀。孢子成熟後顏色變為褐色。表麵平坦或有放射狀溝紋，反麵無色或帶褐色。在低倍顯微鏡下觀察可見分生孢子頭呈疏鬆放射狀，繼而為疏鬆柱狀。製片鏡檢觀察，可見分生孢子梗很粗糙。頂囊呈燒瓶形或近球形。分生孢子在小梗上呈鏈狀著生，分生孢子的周圍有小突起、球形、粗糙。

2. 黃曲黴毒素檢測方法    化學法、生物學方法和免疫學方法。

1)生物學方法

①抑菌試驗：巨大芽胞杆菌和短芽胞杆菌對AFT最敏感。通過平皿中抑菌圈大小來衡量AFT含量。

②熒光測定法 ：AFT在紫外光照射下可發出熒光。將待檢菌株接種，28～30℃培養48～72h，檢查其特異熒光。此法操作簡便。對AFT最低檢出量為5pg/ml。

③大鼠試驗法：大鼠幼鼠對AFT最敏感，雄性幼鼠比雌性幼鼠敏感性更高，用100～150g大鼠作急性中毒試驗，一般3～4d死亡。

④雞胚試驗；

⑤鴨雛試驗：鴨雛對AFT非常敏感，致死性強，一般用一次劑量後72小時內死亡。

⑥斑點試驗：本法用於檢測真菌毒素致突變試驗的一種有意義的方法。主要利用沙門氏菌/微粒體突變性來檢測某些樣品種AFT的存在與含量。

2)免疫學方法

AFT是分子量為312～346的二氫呋喃香豆素的衍生物，無免疫原性，不能引起抗體的產生，故必須與大分子化學基團或蛋白質偶聯，成為完全抗原，方能引起免疫動物的抗體形成，然後利用血清學方法檢測AFT。由於AFT的量一般都較低，因此，檢測方法主要是敏感性較高的放射免疫測定法(RIA)和酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。近幾年來，國外已成功製備了測定B1的酶聯免疫測定盒及檢測乳中Ml含量的RIA檢測盒。這兩種檢測盒都十分方便，而且快速準確。