溶血性鏈球菌及其檢驗

溶血性鏈球菌及其檢驗
Examination of Streptococcus hemolyticus

一、溶血性鏈球菌

鏈球菌屬(Streptococcus)是一個古老的屬，按溶血性有甲、乙、丙3型，用蘭氏血清學分類法可將其分為從A、B、C、D、E、F、G、H、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T、U、V共20個血清群。1974年以後，又從中分出了腸球菌屬、乳球菌屬和遊走球菌屬，因此原來的鏈球菌屬分成了幾個屬。鏈球菌在自然界分布廣泛，是食物汙染的重要原因。文獻報導，許多由食物引起的膿毒性咽喉痛和猩紅熱，是由A群鏈球菌引起，近年來，由鏈球菌引起的食物中毒已逐漸為人們所注意。鏈球菌性食物中毒，經常由乳、肉類食品所引起，多為α溶血型。β溶血型鏈球菌引起食物中毒較少。溶血性鏈球菌可引起皮膚化膿性感染、乳房炎、敗血症等多種疾病；可通過多種途徑汙染乳、乳製品和肉類製品，並大量增殖而引起食物中毒。

 

The beta-hemolytic streptococci are further divided into groups based on their Lancefield antigen.  This is a cell wall carbohydrate that is characteristic of that particular Group of b-hemolytic streptococci.

 

The only exception is the former Group D streptococci (now a separate genus: Enterococcus) that have glycerol teichoic acid as their Lancefield antigen.

 

Among the beta-hemolytic streptococci, Streptococcus pyogenes is the most virulent for humans.

一)生物學特性

1、形態染色特性

革蘭氏陽性，圓形或卵圓形，直徑0.5～ 1μm，成雙或呈鏈狀排列。鏈的長短與細菌種類及生長環境有關，在液體培養基中易形成長鏈，固體培養基上常成短鏈，致病性鏈球菌一般鏈較長。不形成芽孢，無鞭毛，不能運動。少數菌株在血清肉湯幼齡培養物中可形成微莢膜，但延長時間後即消失。

2、培養特性

1)需氧或兼性厭氧。生長溫度20～42℃，最適溫度37℃。最適pH為7.4～7.6。

2)多數致病性菌株的營養要求較高，在普通培養基上生長不良，必須加血液、血清、腹水等。

3)血瓊脂平板：灰白色、半透明或不透明、表麵光滑、有乳光、直徑0.5～0.75mm、圓形凸起的細小菌落。不同菌株溶血情況不同：甲型(α型)、乙型(β型)、丙型(γ型)溶血。

4)血清肉湯：呈顆粒狀生長，大多沉於管底，肉湯不太渾濁。溶血性鏈球菌形成的鏈較長，呈典型的絮狀或顆粒狀生長，或粘附於管壁上。不溶血菌株鏈較短，肉湯均勻渾濁。

Streptococci are Gram-positive cocci that grow in chains or pairs. Cell division occurs in a single plane resulting in chains. Streptococci are catalase negative. This is used to distinguish Streptococcus species from Staphylococcus species. facultative organisms. Streptococci are auxotrophic, and need to be cultured on enriched media to grow.  Streptococci are typically grouped by hemolysis on blood agar plates: Alpha hemolysis occurs when the RBCs are intact, but hemoglobin is converted to biliverdin .  This causes a greening of the plate. Beta hemolysis is true hemolysis due to the actions of a hemolysin, an erythrocyte lysing enzyme.  The plate becomes clear where the blood cells have been lysed.  Gamma hemolysis is actually no hemolysis.

3、生化特性

對常用的糖類，發酵後產酸不產氣。分解葡萄糖後產生乳酸和少量甲酸、醋酸與乙醇。對乳糖、甘露醇、水楊苷的發酵能力因菌株不同而異；鏈球菌一敏不分解菊糖，不被膽汁及10％膽鹽所溶解，這點可用來鑒別鏈球菌和肺炎雙球菌。

腸球菌可在6.5％氯化鈉葡萄糖肉湯、40％膽汁肉湯，pH9.6葡萄糖肉湯和0.1％美蘭牛乳培養基中生長，能在10℃和45℃下生長。這幾點可作為腸球菌和其他鏈球菌的鑒別。人類溶血性鏈球菌可分解蕈糖，山梨醇陰性；動物溶血性鏈球菌則相反。

4．抗原構造

1)核蛋白抗原或稱P抗原：無群型特異性，各種鏈球菌均同，與葡萄球菌有交叉，不能用於分類。

2)多糖抗原或稱C抗原(群特異性抗原)：具有群特異性，是細菌壁的多糖成份。據此可將鏈球菌分為20個血清群。對人致病的90%屬於A群，其次為B群。

3)型特異性抗原(M抗原) ：又稱蛋白質抗原或稱表麵抗原，是鏈球菌細胞壁的蛋白質成分，位於多糖抗原之外；具有型特異性，基於M蛋白抗原性的不同，可將A群鏈球菌區分為100多個不同的血清型。

二)鏈球菌感染

致病性鏈球菌可產生多種酶和外毒素，如溶血素、紅疹毒素、鏈道酶(DNA酶)、鏈激酶(溶纖維蛋白酶)、致死毒素、殺白細胞素、透明質酸酶、蛋白酶等。感染人類的主要是： A群(化膿鏈球菌，S. pyeogenes)～90％， B群(無乳鏈球菌，S. agalactiae)， 肺炎鏈球菌(S. pneumoniae )。引起豬病並偶爾經傷口感染人的鏈球菌主要有：D群的腸球菌,  R群的豬鏈球菌2型，F群的咽唊炎鏈球菌， L、S、T、U、V群鏈球菌等。

二  檢驗

一)常規檢驗    GB/T 4789.11-2003

主要包括如下步驟：1、增菌培養； 2、分離培養； 3、生化試驗： 1)鏈激酶試驗；2)杆菌肽敏感試驗；3)馬尿酸鈉水解試驗；4)澱粉水解試驗；5)明膠液化             二)動物試驗

三)血清學試驗：分群鑒定；分型鑒定。

1)鏈激酶試驗：吸取健康人血漿0.2mL(草酸鉀0.01g，加入5mL人血混勻，離心後取上清即為血漿)，加入0.8mL生理鹽水，混勻，再加18～24h鏈球菌肉湯培養物0.5mL及0.25%氯化鈣0.25mL，振蕩混勻。置37℃水浴中，每隔幾分鍾觀察1次，血漿凝固(約10min)後，注意觀察及記錄溶化的時間。強陽性者可在20min內完全溶化凝固的血漿；24h仍不溶化者為陰性。

2)杆菌肽敏感試驗：挑取乙型溶血性鏈球菌濃菌液，塗布於血平板上，用滅菌鑷子夾取每片含有0.04單位的杆菌肽紙片，放於上述平板上，於37℃培養18～24小時，如有抑菌帶出現即為陽性，可初步鑒定為A群鏈球菌。同時用已知陽性菌株作為對照。

根據溶血性，可把鏈球菌分為

(1)甲型溶血性鏈球菌(α-Hemolytic streptococcus)：菌落周圍有1～2mm寬的草綠溶血環，稱甲型溶血或α溶血。亦稱草綠色鏈球菌(Streptococcus viridans)。為條件致病菌

(2)乙型溶血性鏈球菌(β-Hemolytic streptococcus)：菌落周圍形成一個2～4mm寬，界限分明、完全透明的溶血環，完全溶血，稱乙型溶血或β溶血。又稱溶血性鏈球菌(Streptoccus hemolyticus)。致病力強，引起多種疾病。

(3)丙型鏈球菌(γ-Streptococcus)：不產生溶血素，菌落周圍無溶血環，故又稱不溶血性鏈球菌(Streptococcus non-hemolytics)。一般不致病。