金黃色葡萄球菌及其檢驗

金黃色葡萄球菌及其檢驗
Examination of Staphylococcus aureus

葡萄球菌(Staphylococcus)是引起人類和動物化膿性感染的最重要病原菌，可引起人類丘疹、癤、膿腫、骨髓炎和腦膜炎以及奶牛的乳房炎，又是引起人類食物中毒的最常見細菌之一。

 

葡萄球菌包括金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌。

 

引起食物中毒的主要是金黃色葡萄球菌，致病因素是其在食品中繁殖後產生的腸毒素(enterotoxin)，故屬於毒素型中毒。

 

中毒的原因食品主要是乳類、肉類、魚類及含澱粉高的食物(如剩米飯等)，特別是經過加熱處理的食品。

 

Staphylococcus is a very well known genus of bacteria. Colonies are "gold," or yellow on sheep blood agar solid media, hence the name. A common pathogen, boils, acne, wound infections, food poisoning are among a host of conditions caused by this organism.

 

The organism is both pathogenic and invasive. It produces leukotoxin which can kill white blood cells and a wide variety of other toxins.

 

S. aureus is quite pyogenic and in decades past was named Staphylococcus pyogenes.

 

The 'superbug' MRSA (methicillin-resistant Staphylococcus aureus) :MRSA is resistant to the majority of antibiotics commonly used in hospitals and there are fears that it might acquire resistance to the remaining effective antibiotic. The number of cases in the UKhas grown 600% in eight years.

一、金黃色葡萄球菌

葡萄球菌不同菌株在固體培養基產生不同的顏色，從而分為金黃色葡萄球菌，白色葡萄球菌、檸檬色葡萄球菌。

一)生物學特性

1. 形態染色特性

革蘭氏陽性球菌，直徑0.4～1.2µm，致病性菌株形態較小，呈葡萄串狀排列。無芽孢，無鞭毛，一般不形成莢膜。

2. 培養特性

兼性厭氧，在普通培養基上生長良好。金黃色葡萄球菌通常產生金黃色色素，多數溶血。在普通肉湯中培養24h後，均勻渾濁生長；2～3天後可形成菌膜；老齡培養物管底可有粘稠沉澱物。耐鹽性強,在含10％ ～15％氯化鈉培養基中亦能生長。  普通瓊脂上：圓形、凸起、邊緣整齊、表麵光滑、濕潤、不透明的中等大小菌落，直徑一般為1～ 2mm。Baird-Parker氏瓊脂上：菌落為圓形、光滑、凸起、濕潤，直徑為2～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣色淡，周圍為一渾濁帶，其外層有一透明帶。

3. 生化特性

本菌大多數能分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產酸不產氣。不產生靛基質，能還原硝酸鹽，可凝固牛乳，MR試驗陽性，V-P試驗不定。多數致病性菌株過氧化氫酶和血漿凝固酶陽性，產生金黃色色素，發酵甘露醇產酸不產氣。

4. 血清學特性

葡萄球菌有蛋白質抗原和多糖類抗原。蛋白質抗原為完全抗原，有種屬特異性，無型別特異性；存在於葡萄球菌表麵，是細胞壁的成分，稱為葡萄球菌A蛋白(Staphylococcus protein A，SPA)。SPA可與IgG的Fc片段結合，因而可用含SPA的葡萄球菌作為載體，結合特異性抗體，進行協同凝集試驗等，作為快速的診斷方法。  多糖類抗原為半抗原，有型特異性，可用來對葡萄球菌進行分型。

二)葡萄球菌腸毒素

金黃色葡萄球菌除具有以上特性外，在生長繁殖過程中還產生很多毒素和酶，其中主要有溶血毒素、腸毒素、殺白細胞素、血漿凝固酶、DNA酶、耐熱性核酸酶和透明質酸酶等。葡萄球菌腸毒素(enterotoxin)是一種多肽單鏈結構的可溶性蛋白質，目前已發現的有A、B、C1、C2、C3、D、E、F共8個型，引起中毒的以A型最多。金黃色葡萄球菌產生腸毒素的適宜條件是含澱粉和水分較多的食品，並要求一定的溫度、pH等。在20～37C下經4－8h即可產生毒素。 葡萄球菌腸毒素耐熱，一般烹飪溫度不能將其破壞，經100℃煮沸30min不被破壞，100℃60min仍保持部分活性。也不受胰蛋白酶的影響。誤食汙染腸毒素的食物後，在腸道作用於內脂神經受體，傳入中樞，刺激嘔吐中樞，引起嘔吐，並產生急性胃腸炎症狀。發病急，病程短，恢複快。一般潛伏期為1～6h，最短者0.5h，出現頭暈、嘔吐、腹瀉，發病1～2日可自行恢複，預後良好。

 

 

二、葡萄球菌檢驗

一)常規檢驗       參見：《動物性食品檢驗學》河南農業大學主編第五章第三節 P59

取檢樣進行增菌和分離培養，觀察溶血情況，然後挑取可疑菌落做塗片鏡檢，並進行血漿凝固酶試驗。凡形態和菌落特征典型，溶血，血漿凝固酶陽性，即可報告為金黃色葡萄球菌。

二)葡萄球菌致病因子測定

血漿凝固酶試驗、耐熱核酸酶試驗、酸性磷酸酶試驗、鉬酸銨還原試驗和腸毒素檢測等。

1、血漿凝固酶實驗    致病性菌株血漿凝固酶一般為陽性。檢驗方法有玻片法、試管法和微管法

2、耐熱核酸酶試驗    近年來發現金黃色葡萄球菌產生的核酸酶能耐受煮沸而不被破壞，且其最適pH為9.0，這些特點與其它細菌不同，可作為鑒定方法之一。

3M快速金黃色葡萄球菌數測試片：金黃色葡萄球菌呈紅色或藍色菌落，耐熱核酸酶環帶顯示粉紅色。

3、酸性磷酸酶試驗 致病性葡萄球菌具有酸性磷酸酶，可將吲哚磷酸鹽水解為藍綠色靛藍。而非致病性菌株不具有此酶，基質不變，仍為無色。

4、毒素測定 從食品檢樣中提取和檢測腸毒素采用濃縮法層析法和ELISA法。