微生物檢驗基本知識

包括顯微鏡檢、染色技術、培養基製備技術、接種、分離純化和培養技術等

一、接種(inoculation)

將微生物接到適於它生長繁殖的人工培養基上或活的生物體內的過程叫做接種。

1. 接種工具  接種針 接種環 接種鉤 玻璃塗棒 接種圈 接種鋤小解剖刀

2. 常用的接種方法      有以下幾種：

1)劃線接種   最常用。常用的接種工具有接種環，接種針等。在斜麵接種和平板劃線中就常用此法。

2)三點接種   在研究黴菌形態時常用此法。此法即把少量的微生物接種在平板表麵上，成等邊三角形的三點，讓它各自獨立形成菌落後，來觀察、研究它們的形態。

3)穿刺接種   在保藏厭氧菌種或研究微生物的動力時常用。用的接種工具是接種針。培養基一般是半固體培養基

4)傾注接種   該法是將待接種微生物先放入培養皿中，然後再倒入冷卻至45°C左右的固體培養基，迅速輕輕搖勻，以達到稀釋菌液的目的。待平板凝固之後，置合適溫度下培養，就可長出單個的微生物菌落。

5)塗布接種   先倒好平板，讓其凝固，然後再將菌液倒入平板上麵，迅速用塗布棒在表麵作來回左右的塗布，使菌液均勻分布，即可長出單個菌落。

6)液體接種   從固體培養基中將菌洗下，倒入液體培養基中；或者從液體培養物中，用移液管將菌液接至液體培養基中，都屬於液體接種。

7)注射接種   用注射的方法將微生物轉接至活的生物體內，常見的疫苗預防接種，就是用注射接種。

8)活體接種   是專用於培養病毒或其它病原微生物的一種方法。所用的活體可以是整個動物；也可以是某個離體活組織，例如猴腎等；也可以是發育的雞胚。接種的方式有注射、灌喂、拌料喂養等。

3. 無菌操作(Aseptic technique)

培養基經高壓滅菌後，用經過滅菌的工具(如接種針和吸管等)在無菌條件下接種含菌材料(如樣品、菌苔或菌懸液等)於培養基上，這個過程叫做無菌接種操作。      在實驗室檢驗中的各種接種必須是無菌操作。

二、分離純化(Isolation)

含有一種以上的微生物培養物稱為混和培養物(Mixed culture)。如果在一個菌落中所有細胞均來自於一個親代細胞，那麽這個菌落稱為純培養(Pure culture)。

在進行菌種鑒定時，所用的微生物一般均要求為純的培養物。得到純培養的過程稱為分離純化，方法有許多種。

1、傾注平板法( Pour plate )                 2、塗布平板法(Spread plate)

3、平板劃線法(Streak plate)

常見的比較容易出現單個菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、放射法、四格法等。

4、富集培養法

富集培養法的方法和原理非常簡單。我們可以創造一些條件隻讓所需的微生物生長，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進行競爭，在生長能力方麵遠遠超過其它微生物。如果要分離一些專性寄生菌，就必須把樣品接種到相應敏感宿主細胞群體中，使其大量生長。通過多次重複移種便可以得到純的寄生菌。

5、厭氧法

在實驗室中，為了分離某些厭氧菌，可以利用裝有原培養基的試管作為培養容器，把它放在沸水浴中加熱數分鍾，以便逐出溶解氧。然後快速冷卻，並進行接種。接種後，加入無菌石蠟於培養基表麵，使與空氣隔絕。另一種方法是，在接種後，利用N2或CO2取代培養基中的氣體，然後在火焰上把試管口密封。

有時為了更有效地分離某些厭氧菌，可以把所分離樣品接種於培養基上，然後再把培養皿放在完全密封的厭氧培養裝置中。

三、培養

1、根據培養時是否需要氧氣，可分為好氧培養和厭氧培養。

好氧培養(Aerobic Incubation) ：也稱“好氣培養”。   厭氧培養(Anaerobic Incubation)：也稱“厭氣培養”。

2、根據培養基的物理狀態，可分為固體培養和液體培養兩大類：固體培養：solid incubation 液體培養：liquid incubation