阪崎腸杆菌噬菌體的分離及其生物學特性（2）

2   結果

2.1        噬菌體的分離與確證

按照1.6方操作，有5份樣品增值物能使阪崎腸杆菌裂解或在其菌苔上產生裂解區域或噬菌斑的物質能夠轉接或純化特性說明這些物質不是抗生素或細菌黴素。經隨機擴增多態性（RAPD）分析，表明它們為5株不同的噬菌體，分別命名為SKI、SK2、SK3、SK4、和SK5。

5株噬菌體的工作滴度（RTD）和每mL空斑形成單位（PFU/mL）:SKI為10^-4和4.4×10¹⁰；SK2為10^-2和1.58×10⁹；SK3為10^-2和1.78×10⁷；SK4為10^-2和2.12×10⁶。

2.2噬菌體粒子形態

5株噬菌體均由多麵體的頭部和尾部組成，噬菌體頭部較大，尾部粗長，5株噬菌體的整體形態相似，大小略有差異。

2.3噬菌體生物特性

2.3.1  對ATCC參考菌株的易感性：分別測試了5株噬菌體對阪崎腸杆菌ATCC,29544,29004,12868和51329的敏感性。SKI僅僅對其分離菌株ATCC 29544敏感，並表現出較高的滴度。根據ATCC的信息資料，阪崎腸杆菌ATCC 29544也是用於DNA雜交的參考菌株。SK2,對所有4株阪崎腸杆菌參考菌株敏感，並具有較高滴度。值得注意的是，其宿主ATCC 12868最初是作為陰溝腸杆菌被收集保藏的。SK3除對其宿主ATCC 29004敏感外，還對ATCC 29544, 51329表現出裂解活性。噬菌體SK4和SK5的指示菌為奶粉中分離的阪崎腸杆菌，SK4對ATCC參考菌株均不敏感，而SK5對ATCC的參考菌株產生渾濁的噬菌斑（表1）。

2.3.2  宿主範圍：為準確評價噬菌體的裂解活動性，在測定宿主範圍時，采用純化後的噬菌體的工作滴度即RTD,除27株阪崎腸杆菌外，還使用了7株腸杆菌科，表2裂解活性。

5株噬菌體SK1，SK2，SK3，SK4，和SK5對非阪崎腸杆菌以外的7株腸杆菌科細菌不敏感。SK1僅能裂解27株分離株中的6株（22％），SK2則能裂解24株（89％），是5株噬菌體中裂解範圍最寬的噬菌體，SK5也表現出較寬的裂解範圍（74％），但是其形態學特征不同於SK2，對於SK2而言，63％為完全裂解或融合性裂解（confluent lysis,CL），而SK5，63％的裂解模式（opaque lysis,OL）,詳見表2。對4株ATCC參考菌株不敏感的噬菌體SK4，表現出較窄的裂解範圍，僅能裂解27株實驗菌株中的4株，而且，隻有1株為CL裂解。

表1  分離的噬菌體在阪崎腸杆菌菌苔上行成的空斑形態及其來源

Table 1  IsolatedE.sakazakii phages:plaque morphology and source

a:Information from ATCC.b:No plaque.

表2 噬菌體宿主範圍

Table 2   Host ranges specific to the E.sakazakii

“-”Notsensitive;“CL”confluent lysis;“OL”opaque lysis.

 

討論

以來源於臨床和環境標本、具有代表性的阪崎腸杆菌作為指示菌，從汙水中分離出的5 株阪崎腸杆菌噬菌體，SKI、SK2、SK3、SK4和SK5，在生物學特性試驗中，表現出清晰的相同的種特異性，但對同種菌株的易感程度卻表現出寬窄不同的範圍。

分離的阪崎腸杆菌噬菌體通過電子顯微鏡來觀察，所釋放噬菌體的頭部為20麵體，尾部為較粗長尾，根據2005年國際病毒分類委員會第八次報告所提出的分類準則，本研究所分離的5株噬菌體的形態較為符合肌尾噬菌體科(myoviridae) 特征， 5株噬菌的核酸應為d sDNA^［9］。進一步通過DNA分析，顯示這些噬菌體具有不同的基因型，不同的特征反映了阪崎腸杆菌的多樣性。

腸杆菌科細菌的分類和命名在近年來一直在變化。阪崎腸杆菌最初被認為是產黃色素的陰溝腸杆菌。噬菌體SK4和SK5對阪崎腸杆菌參考菌株不敏感，說明了地方株和參考菌株之間在某些方麵存在著差異；僅能裂解其分離宿主ATCC 29544的噬菌體SKI，顯示了其特殊性，因為ATCC 29544是用於DNA 雜交的模式菌株；對4株ATCC菌株均易感的噬菌體SK2，對絕大部分分離菌株也表現出較好的裂解性；最初被稱為陰溝腸杆菌保存的、現在被更名為阪崎腸杆菌的參考菌株ATCC12868，也僅能被SK2裂解。上述結果提示我們，噬菌體SKI，SK2和SK3可用於阪崎腸杆菌的分類和鑒別。

盡管分離的噬菌體沒有一種能夠完全裂解27株阪崎腸杆菌，但是按照5株噬菌體的宿主範圍，SK2，SK3，SK4和SK5結合使用能夠裂解27株試驗菌株，在噬菌體被認為是一種消除病原體或減少其危害的有效手段前提下，通過進一步試驗，希望能夠用於嬰幼兒配方粉生產過程及環境中阪崎腸杆菌的控製。

作者：趙貴明，仉慶文，姚李四，陳穎

作者單位：中國檢驗檢疫科學研究院，北京100123

 

參考文獻

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