實驗室常用貯存液的配製參數(下)

16.IPTG溶液

 

【配製方法】IPTG為異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量為238.3)，在8ml蒸餾水中溶解2g IPTG後，用蒸餾水定容至10ml，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成1ml小份貯存於-20℃。

 

17.1mol/L乙酸鎂溶液

 

【配製方法】在800ml水中溶解214.46g四水乙酸鎂，用水定容至1L過濾除菌。

 

18.1mol/L MgCl2溶液

 

【配製方法】在800ml水中溶解203.4g MgCl2?6H2O，用水定容至1L，分裝成小份並高壓滅菌備用。

 

【注意】MgCl2極易潮解，應選購小瓶(如100g)試劑，啟用新瓶後勿長期存放。

 

19.β-巰基乙醇(BME)溶液

 

【配製方法】一般得到的是14.4mol/L溶液，應裝在棕色瓶中保存於4℃。

 

【注意】BME或含有BME的溶液不能高壓處理。

 

20.NBT溶液

 

【配製方法】把0.5g氯化氮藍四唑溶解於10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存於4℃。

 

21.酚/氯仿溶液

 

【配製方法】把酚和氯仿等體積混合後用0.1mol/L Tris?HCl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物，置棕色玻璃瓶中，上麵覆蓋等體積的0.01mol/l Tris?HCl(pH7.6)液層，保存於4℃。

 

【注意】酚腐蝕性很強，並可引起嚴重灼傷，操作時應戴手套及防護鏡，穿防護服。所有操作均應在化學通風櫥中進行。與酚接觸過的部位皮膚應用大量的水清洗，並用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。

 

22.10mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液

 

【配製方法】用異丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml(10mmol/L)，分裝成小份貯存於-20℃。如有必要可配成濃度高達17.4mg/ml的貯存液(100mmol/L)。

 

【注意】PMSF嚴重損害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚，吸入、吞進或通過皮膚吸收後有致命危險。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF，應立即用大量水衝洗之。凡被PMSF汙染的衣物應予丟棄。PMSF在水溶液中不穩定。應在使用前從貯存液中現用現加於裂解緩衝液中。PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高於4℃。pH值為8.0時，20μmmol/l PMSF水溶液的半壽期大約為85min，這表明將PMSF溶液調節　為堿性(pH>8.6)並在室溫放置數小時後，可安全地予以丟棄。

 

23.磷酸鹽緩衝溶液(PBS)溶液

 

【配製方法】在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl調節　溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌20min。保存於室溫。

 

24.1mol/L乙酸鉀(pH7.5)溶液

 

【配製方法】將9.82g乙酸鉀溶解於90ml純水中，用2mol/L乙酸調節　pH值至7.5後加入純水定容到1L，保存於-20℃。

 

25.乙酸鉀溶液(用於堿裂解)

 

【配製方法】在60ml 5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度為5mol/L的溶液。

 

26.3mol/L乙酸鈉(pH5.2和pH7.0)溶液

 

【配製方法】在80ml水中溶解408.1g三水乙酸鈉，用冰乙酸調節　pH值至5.2或用稀乙酸調節　pH值至7.0，加水定容到1L，分裝後高壓滅菌。

 

27.5mol/L NaCl溶液

 

【配製方法】在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分裝後高壓滅菌。

 

28.10%十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液

 

【配製方法】在900ml水中溶解100g電泳級SDS，加熱至68℃助溶，加入幾滴濃鹽酸調節　溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分裝備用。

 

【注意】SDS的微細晶粒易擴散，因此稱量時要戴麵罩，稱量完畢後要清除殘留在稱量工作區和天平上的SDS，10%SDS溶液無須滅菌。

 

29.20×SSC溶液

 

【配製方法】在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g檸檬酸鈉，加入數滴10mol/l NaOH溶液調節　pH值至7.0，加水定容至1L，分裝後高壓滅菌。

 

30.20×SSPE溶液

 

【配製方法】在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4?H2O和7.4g EDTA，用NaOH溶液調節　pH值至7.4(約需6.5ml 10ml/L NaOH)，加水定容至1L，分裝後高壓滅菌。

 

31.100%三氯乙酸溶液

 

【配製方法】在裝有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%(M/V)TCA。

 

32.1mol/L Tris溶液

 

【配製方法】在800ml水中溶解121.91g Tris堿，加入濃HCl調節　pH值至所需值。應使溶液冷至室溫後方可最後調定pH值，加水定容至1L，分裝後高壓滅菌。

 

【注意】如1mol/L溶液呈現黃色，應予丟棄並置備質量更好的Tris。

 

盡管多種類型的電極均不能準確測量Tris溶液的pH值，但仍可向大多數廠商購得合適的電極。Tris溶液的pH值因溫度而異，溫度每升高1℃，pH值大約降低0.03個單位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃時的pH值分別為9.5、8.9和8.6。

 

33.Tris緩衝鹽溶液(TBS)(25mmol/l Tris)

 

【配製方法】在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris堿，加入0.015g酚並用HCl調至pH值至7.4，用蒸餾水定容至1L，分裝後在151bf/in2(1.034×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20min，於室溫保存。

 

34.X-gal溶液

 

【配製方法】X-gal為5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配製成的20mg/ml的貯存液。保存於一玻璃管或聚丙烯管中，裝有X-gal溶液的試管須用鋁箔封裹以防因受光照而被破壞，並應貯存於-20℃。X-gal溶液無須過濾除菌