實驗室常用貯存液的配製參數（上）

1.30%丙烯酰胺溶液

 

【配製方法】將29g丙烯酰胺和1g N，N’-亞甲雙丙烯酰胺溶於總體積為60ml的水中。加熱至37℃溶解之，補加水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45μm孔徑)過濾除菌，查證該溶液的pH值應不大於7.0，置棕色瓶中保存於室溫。

 

【注意】丙烯酰胺具有很強的神經毒性並可以通過皮膚吸收，其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時應戴手套和麵具。可認為聚丙烯酰胺無毒，但也應謹慎操作，因為它還可能會含有少量未聚合材料。一些價格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子，在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹脂(MB-1Mallinckrodt)，攪拌過夜，然後用Whatman 1號濾紙過濾以純化之。在貯存期間，丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會緩慢轉化成丙烯酰和雙丙烯酸。

 

2.40%丙烯酰胺

 

【配製方法】把380g丙烯酰胺(DNA測序級)和20g N，N’-亞甲雙丙烯酰胺溶於總體積為600ml的蒸餾水中。繼續按上述配製30%丙烯酰胺溶液的方法處理，但加熱溶解後應以蒸餾水補足至終體積為1L。

 

【注意】見上述配製30%丙烯酰胺的說明，40%丙烯酰胺溶液用於DNA序列測定。

 

3.放線菌素D溶液

 

【配製方法】把20mg放線菌素D溶解於4ml 100%乙醇中，1：10稀釋貯存液，用100%乙醇作空白對照讀取OD440值。放線菌素D(分子量為1255)純品在水溶液中的摩爾消化係數為21，900，故而1mg/ml的放線菌素D溶液在440nm處的吸光值為0.182，放線菌素D的貯存液應放在包有箔片的試管中，保存於-20℃。

 

【注意】放線菌素D是致畸劑和致癌劑，配製該溶液時必須戴手套並在通風櫥內操作，而不能在開放在實驗桌麵上進行，謹防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。

 

藥廠提供的作治療用途的放線菌素D製品常含有糖或鹽等添加劑。隻要通過測量貯存液在440nm波長處的光吸收確定放線菌素D的濃度，這類製品便可用於抑製自身引導作用。

 

4.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液

 

【配製方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH調至pH值至7.0，用蒸餾水定容1ml，分裝成小份保存於-70℃

 

5.10mol/L乙酸酰溶液

 

【配製方法】把770g乙酸酰溶解於800ml水中，加水定容至1L後過濾除菌。

 

6.10%過硫酸銨溶液

 

【配製方法】把1g過硫酸銨溶解於終量為10ml的水溶液中，該溶液可在4℃保存數周。

 

7.BCIP溶液

 

【配製方法】把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二鈉鹽(BCIP)溶解於10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存於4℃

 

8.2×BES緩衝鹽溶液

 

【配製方法】用總體積90ml的蒸餾水溶解1.07g鹽溶液BES[N，N-雙(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4，室溫下用HCl調節　該溶液的pH值至6.96、然後加入蒸餾水定容至100ml，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成小份，保存於-20℃。

 

9.1mol/L CaCl2溶液

 

【配製方法】在200ml蒸餾水中溶解54g CaCl2?6H2O，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成10ml小份貯存於-20℃。

 

【注意】製備感受態細胞時，取出一小份解凍並用蒸餾水稀釋至100ml，用Nalgene濾器(0.45μm孔徑)過濾除菌，然後驟冷至0℃。

 

10.2.5mol/L CaCl2溶液

 

【配製方法】在20ml蒸餾水中溶解13.5g CaCl2?6H2O，用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成1ml小份貯存於-20℃。

 

11.1mol/L二硫蘇糖醇(DTT)溶液

 

【配製方法】用20ml 0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT，過濾除菌後分裝成1ml小份貯存於-20℃。

 

【注意】DTT或含有DTT的溶液不能進行高壓處理。

 

12.脫氧核苷三磷酸(dNTP)溶液

 

【配製方法】把每一種dNTP溶解於水至濃度各為100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris堿分別調節　每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH試紙檢測)，把中和後的每種dNTP溶液各取一份作適當稀釋，在給出的波長下讀取光密度計算出每種dNTP的實際濃度，然後用水稀釋成終濃度為50mmol/L的dNTP，分裝成小份貯存於-70℃。

 

13.0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液

 

【配製方法】在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na?2H2O)，在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用NaOH調節　溶液的pH值至8.0(約需20g NaOH顆粒)然後定容至1L，分裝後高壓滅菌備用。

 

【注意】EDTA二鈉鹽需加入NaOH將溶液的pH值調至接近8.0，才能完全溶解。

 

14.溴化乙錠(10mg/ml溶液)

 

【配製方法】在100ml水中加入1g溴化乙錠，磁力攪拌數小時以確保其完全溶解，然後用鋁箔包裹容器或轉移至棕色瓶中，保存於室溫。

 

【注意】小心：溴化乙錠是強誘變劑並有中度毒性，使用含有這種染料的溶液時務必戴上手套，稱量染料時要戴麵罩。

 

15.2×HEPES緩衝鹽溶液

 

【配製方法】用總量為90ml的蒸餾水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4?2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH調節　pH值至7.05，再用蒸餾水定容至100ml。用0.22μm濾器過濾除菌，分裝成5ml小份，貯存於-20℃。