芒果甙對痤瘡主要致病菌的抑菌作用研究

【摘要】  目的探討芒果甙對痤瘡主要致病菌的抑菌作用，為深度開發芒果樹藥用植物資源提供研究依據。方法采用液體試管法，進行金黃色葡萄球菌的常規培養及痤瘡丙酸杆菌的厭氧培養，按試管稀釋法調整細菌濃度;以紅黴素為對照，觀察芒果甙對痤瘡丙酸杆菌及金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度(MIC)。結果芒果甙對痤瘡主要致病菌有一定的抑菌作用但不如紅黴素明顯，芒果甙對痤瘡丙酸杆菌的MIC為8mmol/L;對金黃色葡萄球菌的MIC為20mmol/L;而紅黴素對痤瘡丙酸杆菌的MIC為160μmol/L;對金黃色葡萄球菌的MIC為20μmol/L;100μmol/L的芒果甙能把紅黴素的MIC濃度從160μmol/L下降至0.160μmol/L。結論芒果甙可降低紅黴素的最低抑菌濃度，兩者配伍使用，可降低紅黴素的使用劑量。

【關鍵詞】  芒果甙;丙酸杆菌，痤瘡;葡萄球菌，金黃色;最低抑菌濃度;微生物敏感性試驗

　Abstract:ObjectiveTo investigate suppressive effects of Mangiferin on Propionibacterium Acnes in vitro, so as to provide research evidence for further exploiting the drug plant resources of Mango trees.MethodsA fluid test tubemethod was used to perform normal Staphylococcus aureus culture and Staphylococcus aureus anaerobic culture, and the cell concentrations were regulated in tube　dilution series. The erythromycin was used as control, the minimal inhibitory concentration (MIC) of Mangiferin on Propionibacterium Acnes and Staphylocous aureus were observed.ResultsMangiferin can inhibit the Propionibacterium acnes to some extent, but not as sensitive as erythromycin. The MIC of Mangiferin toPropionibacterium acnes is 8 mmol/L and to Staphylocous aureus is 20mmol/L. TheMIC of erythromycin to Propionibacterium acnes is 160 μmol/L and to Staphylocous aureus is 20 μmol/L. The Mangiferin can change the MIC of erythromycin; 100μmol/L of Mangiferin can reduce the MIC of the erythromycin from 160μmol/L to 0.160 μmol/L.ConclusionMangiferin can reduce the MIC of　erythromycin. When combined with erythromycin, it can reduce the dose usage of erythromycin

　　Key words:Mangiferin; Propionibacterium acnes; Staphylococcus aureus; minimal inhibitory concentration (MIC); microbial sensitivity tests

　　痤瘡俗稱“粉刺”、“青春痘”，是一種由多因素引起的常見慢性毛囊、皮脂腺炎症性皮膚病。有研究[1]表明在痤瘡皮損中存在有多種細菌，其中痤瘡丙酸杆菌及金黃色葡萄球菌為主要致病菌，在痤瘡的不同發展階段都存在。痤瘡丙酸杆菌存在於痤瘡發生的多個環節中，它能誘發或加重痤瘡症狀，用藥物減少皮膚毛囊中主要致病菌的數量是目前治療痤瘡的主要途徑之一。芒果甙是一種四羥基吡啶的碳糖甙，屬雙苯吡酮類化合物。有文獻報道[2,3]芒果甙具有抗過氧化脂質、抗炎抗菌的作用。筆者用我實驗室提取純化的芒果甙對痤瘡丙酸杆菌進行體外抑製試驗，現將觀察到的結果報道如下。

　　1材料與方法

　　1.1材料

　　1.1.1受試菌株痤瘡丙酸杆菌(P.acnes)標準菌株ATCC6919(廣東省微生物研究所菌種保藏中心);金黃色葡萄球菌，菌號ATCC29213，衛生部臨床檢驗中心提供。

　　1.1.2試驗藥物芒果甙為本實驗室自行從芒果樹葉中提取純化，按文獻[4]進行純度鑒定，純度達98%。紅黴素購自Sigma公司，貨號：E6376。1.1.3儀器及試劑厭氧培養箱YQX-Ⅱ型(上海新苗醫療器械製造有限公司)，光學顯微鏡為Olympus產品，麥氏比濁管購自溫州市康泰生物科技有限公司;痤瘡丙酸杆菌培養基：碎肉培養基。其他化學試劑均為國產分析純。

　　1.2方法

　　1.2.1培養基配方碎肉培養基：蛋白腖30g，K2HPO45.0g，酵母提取物5.0g，L-半胱氨酸鹽酸鹽0.5g，碎肉提取浸出液1L，碎肉粒200ml，0.025%刃天青4.0ml。肉湯培養基：牛肉浸液(1∶3)1 000ml，蛋白腖10g，氯化鈉5g。

　　1.2.2供試驗培養基及藥液的製備培養基：將培養基pH值調節為7.1～7.2，分裝入小試管中，塞子密封，經121℃高壓滅菌30min置於冰箱4℃中保存備用。芒果甙藥液：稱取一定量芒果甙，用2%NaHCO3溶液熱溶解成100mmol/L芒果甙母液，經0.22μm微孔濾膜過濾除菌備用;紅黴素藥液：稱取一定量紅黴素，用無水乙醇溶液熱溶解成1mmol/L母液，經0.22μm微孔濾膜過濾除菌備用。

　　1.2.3菌懸液的製備將P.acnes標準菌株轉入碎肉培養基中，放入37℃厭氧培養箱中，厭氧環境增菌48～72h。取次代培養24h的菌液用生理鹽水稀釋調整為0.5個麥氏比濁單位(約為1.0×108CFU/ml)，同法配製金黃色葡萄球菌懸液，備用。

　　1.2.4鏡檢觀察金黃色葡萄球菌和痤瘡丙酸杆菌均為革蘭陽性菌，革蘭染色後置於100×100的油鏡鏡檢，鏡下見紫色球或杆菌即為有細菌生長。

　　1.2.5藥敏試驗管的製備采用試管稀釋法。芒果甙藥液試驗管：將芒果甙母液用肉湯培養基稀釋成40mmol/L，20mmol/L，10mmol/L，8mmol/L，4mmol/L，2mmol/L，1mmol/L，0.5mmol/L;紅黴素藥液試驗管：將紅黴素藥液用肉湯培養基稀釋成640μmol/L，320μmol/L，160μmol/L，80μmol/L，40μmol/L，20μmol/L，10μmol/L。芒果甙加紅黴素藥液試驗管：將1/1 000上述紅黴素梯度濃度，按1∶1的體積比例分別加到20mmol/L，10mmol/L，8mmol/L，4mmol/L，2mmol/L，1mmol/L，0.5mmol/L芒果甙梯度濃度中，置於試管(每管2　　ml)中即成。同時設空白對照管、細菌生長對照管、陽性對照管，每組設4個複管，觀察各管細菌生長情況。

　　1.2.6菌懸液的接種用定量加樣槍於上述每個藥液管中加入新鮮配製的稀釋菌液200μl，搖勻，置37℃恒溫、厭氧環境中培養72h，觀察結果。

　　1.2.7結果判定所有的空白對照管、藥物陰性對照管培養基均有細菌生長，說明溶劑對菌　　株生長無影響，對實驗結果無幹擾。任取兩管中少量菌液塗於載玻片中，經革蘭染色，鏡　　檢可見藍色的微小短棒狀杆菌，未見其它雜菌，證明有痤瘡丙酸杆菌生長。藥物最小稀釋管　　中細菌不生長者為該菌對藥物的敏感度，按照藥液含藥量報告。

　　1.2.8結果記錄細菌生長濃度按相應的麥氏比濁管號記錄，0.5號麥氏比濁管細菌的近似濃度為1×108個/ml，1號麥氏比濁管為3×108個/ml，2號為6×108個/ml，3號為9×108個/ml，4號為12×108個/ml，5號為15×108個/ml。

　　2結果

　　2.1紅黴素、芒果甙單獨抑菌作用將紅黴素腸溶片用液體培養基稀釋成640μmol/L，320μmol/L，160μmol/L，80μmol/L，40μmol/L，20μmol/L，10μmol/L，七個梯度，將芒果甙母液用液體培養基稀釋成40 mmol/L，20mmol/L，10mmol/L，8mmol/L，4mmol/L，2 mmol/L，1mmol/L，0.5mmol/L八個濃度，觀察兩種實驗藥物的最小MIC，結果顯示，紅黴　　素對痤瘡丙酸杆菌的MIC為160μmol/L;對金黃色葡萄球菌的MIC為20μmol/L，芒果甙對痤瘡丙酸杆菌的MIC為8mmol/L;對金黃色葡萄球菌的MIC為20mmol/L(見圖1、圖2)。圖1紅黴素對痤瘡丙酸杆菌及金黃色葡萄球菌的抑製作用圖2芒果甙對痤瘡丙酸杆菌及金黃色葡萄球菌的抑製作用

　2.2紅黴素與芒果甙的協同抑菌作用設置0.640μmol/L，0.320μmol/L，0.160μmol/L，0.080μmol/L，0.040μmol/L，0.020μmol/L及0.010μmol/L七個紅黴素低濃度梯度值，與低濃度的芒果甙梯度濃度200μmol/L，100μmol/L，80μmol/L，40μmol/L，20μmol/L，10μmol/L進行相互配伍，觀察各配伍方式對痤瘡丙酸杆菌及金黃色葡萄球菌的抑製作用，結果顯示，0.160μmol/L紅黴素與100μmol/L芒果甙即有強烈的協同抑菌作用(見圖3，圖4)。3紅黴素與芒果甙對痤瘡丙酸杆菌的協同抑菌作用

　　3討論

　　3.1痤瘡的臨床症狀、危害及治療

　　痤瘡是皮膚科的常見疾患，傳統醫學稱之為“肺風粉刺”，是一種與性腺內分泌功能失調有關的毛囊、皮脂腺慢性炎症性皮膚病。因其好發於顏麵、胸、背等處，形成粉刺、丘疹、膿皰結節或囊腫等損害，嚴重影響著人的容顏和身心健康。痤瘡不僅是一種軀體疾病，其在心理、情緒等方麵對患者的影響，不亞於嚴重的哮喘、癲癇、糖尿病、關節炎等疾病，痤瘡患者很容易發生情緒低落，容易焦慮和憤怒，是一種不容忽視的心身疾病，潛在地影響著患者的學習、工作、運動、人際關係和社會生活，使患者生活質量下降。挖掘新藥，開辟溝通渠道，實施對痤瘡患者的醫藥治療和心理社會層麵的安撫是醫療工作者的社會責任。一直以來，用抗生素治療痤瘡是臨床常見的手法，但隨著抗生素的不規範使用甚至濫用，導致細菌對藥物的耐藥現象越來越嚴重，急需開發新的治療方案　　圖4紅黴素與芒果甙對金黃色葡萄球菌的協同抑菌作用

　　3.2芒果甙治療痤瘡的實驗室研究結果及價值分析

芒果甙(亦稱木亡果苷)是一種黃酮類化合物，存在於芒果樹葉、扁桃葉、石葦、龍膽、知母等多種植物中，具有多重藥效作用[2～6]，市場前景廣闊，其更多的藥效品質值得深入開發與探索。本研究設計采用液體試管法，進行金黃色葡萄球菌的常規培養及痤瘡丙酸杆菌的厭氧培養，按試管稱釋法調整細菌濃度，以紅黴素為對照，觀察芒果甙對痤瘡丙酸杆菌及金黃色葡萄球菌的MIC。實驗結果顯示，芒果甙對痤瘡主要致病菌有一定的抑菌作用但不如紅黴素明顯，芒果甙對痤瘡丙酸杆菌的MIC為8mmol/L;對金黃色葡萄球菌的MIC為20mmol/L;而紅黴素對痤瘡丙酸杆菌的MIC為160μmol/L;對黃色葡萄球菌的MIC為20μmol/L;100μmol/L的芒果甙能把紅黴素對痤瘡丙酸杆菌的MIC濃度從160μmol/L下降至0.160μmol/L。芒果甙與紅黴素配合使用時，可起到“藥引”性作用，100μmol/L芒果甙可使紅黴素對痤瘡丙酸杆菌最低抑菌濃度從160μmol/L降至0.160μmol/L，降低了紅黴素的使用量，據此有望成為紅黴素的新藥引之一。

作者：葉海洪，農朝讚，黃嬋娟，黃之虎，潘莉莉 農少雲，韋仕喻，郭淩霄，吳玉清

  　[1]張佳君，張曉東,劉四海.痤瘡丙酸杆菌對中藥痤瘡飲敏感性的探討[J].中藥藥理與臨床,2010,26(1):68-70.

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　　[4]周誌勇,袁丁,黃鶴飛.天然產物抗單純皰疹病毒的研究進展[J].中國藥房,2010,21(3):383-385.

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