1 目的
1.1 了解金黃色葡萄球菌檢驗原理
1.2 掌握金黃色葡萄球菌鑒定要點和檢驗方法
2 原理
葡萄球菌在自然界分布極廣，空氣、土壤、水、飼料、食品(剩飯、糕點、牛奶、肉品等)以及人和動物的體表粘膜等處均有存在，大部分是不致病，也有一些致病的球菌。金黃色葡萄球菌是葡萄球菌屬一個種。可引起皮膚組織炎症，還能產生腸毒素。如果在食品中大量生長繁殖，產生毒素，人誤食了含有毒素的食品，就會發生食物中毒，故食品中存在金黃色葡萄球菌對人的健康是一種潛在危險，檢查食品中金黃色葡萄球菌及數量具有實際意義。
金黃色葡萄球菌能產生凝固酶，使血漿凝固，多數致病菌株能產生溶血毒素，使血瓊脂平板菌落周圍出現溶血環，在試管中出現溶血反應。這些是鑒定致病性金黃色葡萄球菌的重要指標。
3 材料
3.1 樣品
奶、肉、蛋、魚製品和飲料等。
3.2 菌種
金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）
藤黃八疊球菌（Sarcina lutea）
3.3 培養基與試劑
7.5%氯化鈉肉湯、血瓊脂平板、Baird-parker氏培養基、無菌鹽水、兔血漿、革蘭氏染色液。
3.4 其它
顯微鏡、溫箱、離心機、無菌吸管、無菌試管、 無菌平皿、均質器、 載玻片、L型塗布棒、酒精燈、接種環等。
4 流程
5 步驟
5.1 一般培養
稱取25g固體樣品，加入225mL無菌生理鹽水，製成混懸液(液體樣品可不稀釋)。吸取5mL上述混懸液，接種於7.5%氯化鈉肉湯或胰酪腖大豆肉湯50mL培養基內，同時挑取混懸液或液體樣品直接在血平板和Baird-Parker平板劃線分離。同時將對照菌種在上述兩種平板上作劃線分離接種。置36±1℃溫箱培養24h。
5.2 分純培養
將上述血平板和Baird-Parker平板上挑取可疑菌落,先觀察對照的菌落特征,再觀察被檢樣品的菌落.,並挑取可疑菌落在血平板上進行分離純化。若無菌落生長，可用也增菌培養物在上上述平板上劃線分離，在36±1℃溫箱培養24h後再分離純化，挑取可疑菌落及對照菌種進行革蘭氏染色及血漿凝固酶試驗。
5.3 形態特征
本菌為革蘭氏陽性球菌，排列是葡萄狀，無芽孢，無莢膜，致病性葡萄球菌菌體較小，直徑約為0.5～1um。
在肉湯中呈混濁生長，在胰酪腖大豆肉湯內有時液體澄清，菌量多時呈混濁生長，血平板菌落呈金黃色，也有時呈白色，大而突起、圓形、不透明、表麵光滑，周圍有溶血圈。在Baird-Parker平板上為圓形、光滑凸起、濕潤、直徑2～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的硬度。偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落；但無混濁帶及透明圈。長期保存的冷凍或幹燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產生的黑色較淡些，外觀可能粗糙並幹燥。
5.5 血漿凝固酶試驗
挑取上述可疑菌落菌種於肉浸液肉湯，同時將金黃色葡萄球菌和藤黃八疊球菌分別接種於肉浸液肉湯，在36±1℃溫箱培養24h後進行血漿凝固酶試驗。
吸取1∶4新鮮兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入培養24h的金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯培養基0.5mL，振蕩搖勻，放在36℃溫箱或水浴內，每0.5h觀察一次，觀察6h，如呈現凝固，即將試管傾斜或倒置時，呈現凝塊者，被認為是陽性結果。同時以已知陽性和陰性葡萄球菌株及肉湯作為對照。
6 結果
根據形態染色，血平板情況以及血漿凝固酶試驗，判別檢樣有否金黃色葡萄球菌。
7 思考
7.1 金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上的菌落特征如何？為什麽？
7.2 鑒定致病性金黃色葡萄球菌的重要指標是什麽？
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