原理：有些細菌能分解含硫氨基酸，產生硫化氫（H2S），H2S會使培養基中的醋酸鉛或氯化鐵形成黑色的硫化鉛或硫化鐵。
方法1：醋酸鉛瓊脂法
培養基：
肉湯瓊脂 100ml
10％硫代硫酸鈉溶液（新配） 2.5ml
10％醋酸鉛溶液 3ml
三種成份分別高壓滅菌，前二者混合後待涼至60℃，加入醋酸鉛溶液，混合均勻，無菌分裝試管達5～6cm高，立即浸入冷水中，使冷凝成瓊脂高層。
方法：用接種針蘸取純培養物，沿管壁作穿刺，孵育於37℃ 1～2天後觀察，必要時可延長5～7天。培養基變黑色者為陽性。
或將細菌培養於肉湯、肝浸湯瓊脂斜麵或血清葡萄糖瓊脂斜麵，在試管的棉花塞下方掛一約6.5×0.6cm2的浸蘸飽和醋酸鉛溶液（10g醋酸鉛溶於50毫升沸蒸餾水中即成）且已幹燥的濾紙條，於37℃培養，觀察7天，紙條變黑者為陽性結果。
方法2：三氯化鐵明膠培養基法
培養基：
硫腖（Thiopeptone） 25g
明膠 120g
牛肉膏 7.5g
氯化鈉 5g
蒸餾水加至 1000ml
上述成份滅菌後趁熱加入5ml滅菌的10％氯化鐵溶液。立即以無菌操作分裝試管，達5～6cm高，迅速冷凝成高層。
方法：穿刺接種，培養於37℃觀察7天，培養基變黑色者為陽性。
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