【摘要】 目的 探討農藥殘留的快速檢測方法 方法 采用快速測定方法—酶抑製法。 結果 通過對5 添加農藥的蔬菜測定，其回收率 85%～105%，與氣相色譜法的測定結果基本 致。結論 酶抑製法可以用於蔬菜中農藥殘留的快速測定。
【關鍵詞】 農藥殘留;酶抑製法;氣相色譜法;測定
目 我國有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留的分析方法有氣相色譜法、薄層色譜法以及快速測定方法—酶抑製法。氣相色譜法雖是國家標準方法，但要求條件較高，必須具備氣相色譜儀並配有火焰光度檢測器(FPD)或氮磷檢測器(NPD），有適合的色譜柱等，需要昂貴的儀器設備；薄層色譜法檢測方法繁雜，操作難度較 ；酶抑製法雖然不是國標法，但具有檢測快速、設備和試劑簡單、成本低等特點，適合水果蔬菜上市前農藥殘留毒性的檢測，受到基層疾病預防控製機構的普遍歡迎。
1 材料與方法
1.1 試劑配製 （1) pH8.0緩衝溶液：分別取11.9g無水磷酸氫二鉀與362g磷酸二氫鉀，用 1000ml蒸餾水溶解。(2)顯色劑4g/L：分別取80mg二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)和15.6 mg碳酸氫鈉，用20ml緩衝溶液溶解，置於4℃冰箱中保存。(3)底物21.67g/L：取65mg硫代乙酰膽堿，加3.0ml蒸水溶解，搖勻後，置4℃冰箱中保存備用。(4)乙酰膽堿酯酶：3.0mg/L用緩衝溶液溶解，搖勻後，置4℃冰箱中保存備用。(5)有機磷標準儲備液：將從國家農藥質檢中心購買的甲氨磷、敵百蟲、樂果、克百威和滅 威餌品用丙酮配製成1g/L的溶液。標準使用液臨用前配製。
1.2 使用儀器 CL-F2000殘留農藥測定儀(上海複淳軟件科技發展有限公司)；氣相色譜儀：上海天普分析儀器有限公司GC900A高性能氣相色譜儀。
1.3 操作方法 每 樣品做平行樣，首先在試管中加入有機磷標液後，然後分別加入3.0ml緩衝液，50μl乙酰膽堿酯酶液，100μl顯色劑，搖勻後，在37℃放置15min，加入40μl底物；在0.5min內混合均勻，30s後，立即用F2000測定儀進地測定，F2000型快速測定儀記錄1min酶抑製率I%，CK為酶活性的大小。
計算公式：回收率(%)=（I%/I0）×100
式中I%—(菜 +標)提取後測定的抑製率減去菜的空白抑製率；
I0%—直接測定加入農藥抑製率。
2 結果與討論
2.1 條件選擇
2.1.1 酶活性的測定 分別加入20、40、80μl酶，其他試劑為緩衝溶液3ml，顯色劑100μl，底物20μl。測定結果可見，1、2、3 min的線性相似。但酶活性隨著酶的 量增加而增加。隨著時間的變化，酶的活性不斷下降。因此，測定的時間應定為 1或 2 min之內。酶量較少時，靈敏度較低，但酶量大時，靈敏度雖高，但變化較快，使反應不穩定，故取中間值50μl的酶量較佳。
2.1.2 溫度、時間、底物與條件的選擇 在室溫放置與水浴37℃放置酶的活性不同，37℃放置15和20min，酶的活性也不同。實驗結果表明，溫度過低與時間過長，酶的活性均較低；37℃放置15min反應，酶的活性較高。底物應足夠量，否則，反應不夠完全。故取40μl底物為佳。
2.2 標準曲線的測定 將 6種農藥1g/L的丙酮標準儲備液，用蒸餾水稀釋為甲氨磷10mg/L，毒死蜱100mg/L，敵百蟲0.1mg/L，樂果100mg/L，克百威1mg/L，滅多威10mg/L。抑製率：甲氨磷為84.55%，毒死蜱為98.45%，敵百蟲為94.32 %，樂果為48.43 %，克百威為92.76 %，滅多威為88.85 %。克百威、敵百蟲的相關係數可達到0.99，其他幾種農藥達到0.96～0.9，由此證明本方法可以作為篩選方法，確證還需要經過氣相色譜法測定。
2.3 回收率 在蔬菜中添加農藥，用快速測定儀測定，見表1。表1 回收率測定結果由此可見，蔬菜中加標的回收率為85%～105%，能滿足實驗要求。
2.4 精密度 按照2.3添加農藥標準，用快速測定儀測定。由此可見精密度範圍在0.9%～4.3%，滿足實驗要求。
2.5 樣品測定結果 將加標樣用快速檢測方法和氣相色譜法測定，樣品取樣量為10.0g。測定結果表明，兩種方法測定結果基本一致。
3 結論
綜上所述，可以得出快速測定法—酶抑製法能夠可滿足大批樣品農藥殘留的篩選，但對於抑製率超過30%的樣品，應及時進行氣相色譜的分析，以進一步確定農藥的種類和濃度。
4 注意問題
4.1 快速測定法時間 加入底物混勻30s後定時，1min後測定。並保證混勻過程時間一致，一般實驗人員都可在30s內操作完畢。
4.2 溫度和時間 酶抑製的溫度和時間對酶的活性影響較大，應該嚴格控製。
4.3 氣相色譜測定 如果有機磷或氨基甲基甲酸酯類品種增加，可適當增加色譜的柱長度。
作者：馬愛霞《中華醫藥雜誌》
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